【摘要】：再生醫(yī)學(xué)是本世紀(jì)在生物醫(yī)學(xué)史上重要工作之一。肝臟再生及干細(xì)胞的作用一直是大家研究的一個熱點。目前干細(xì)胞移植研究多集中在胚胎干細(xì)胞、骨髓干細(xì)胞等,由于胚胎干細(xì)胞存在著倫理、法律、免疫排斥反應(yīng)等問題,難以用于臨床。自體骨髓來源肝細(xì)胞移植作為新的治療肝衰竭病人方法已被人們所關(guān)注。最近研究表明,骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)具有多向分化潛能,包括向神經(jīng)、血液、心肌、肝細(xì)胞等分化,這些引起了專家們對骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞可塑性的極大興趣。骨髓來源肝細(xì)胞移植不僅解決自體肝細(xì)胞獲取困難、增殖性差等問題,同時為肝臟再生組織工程研究提供了一個平臺。為了探索骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞橫向分化為肝細(xì)胞的作用機制,研究骨髓源性的肝細(xì)胞肝內(nèi)移植定向分化,我們向肝纖維化形成大鼠肝臟內(nèi)移植經(jīng)誘導(dǎo)的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞來源的肝細(xì)胞,觀察其分布、分化情況,并觀察聯(lián)合應(yīng)用中藥軟肝煎對肝纖維化形成大鼠肝臟功能改善的效果。 一.首先我們從SD 大鼠的股骨中提取骨髓干細(xì)胞,利用Percoll 分離液密度梯度離心法結(jié)合貼壁法實現(xiàn)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的體外分離純化、培養(yǎng)、傳代擴增。取第3 代的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞表面抗原CD44、CD34、CD45、CD31、CD90,對骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞進行鑒定。流式細(xì)胞儀觀查結(jié)果顯示CD34、CD45、CD31 陰性,CD44、CD90 陽性。表明提取、分離、培養(yǎng)是非骨髓造血細(xì)胞的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。取第3 代的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞以1×106/cm2的密度分別種植在六孔培養(yǎng)板中,并加入肝細(xì)胞生長因子(HGF)終濃度為20ng/ml 表皮生長因子(EGF)終濃度為1.5μg /ml,進行定向肝細(xì)胞誘導(dǎo)分化,誘導(dǎo)過程中用倒置相差顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)變化。對誘導(dǎo)產(chǎn)生的細(xì)胞,應(yīng)用免疫熒光法進行肝細(xì)胞特異性標(biāo)志CK8、CK18 和白蛋白檢測。其中細(xì)胞檢測出有CK8、CK18 和
[Abstract]:Regenerative medicine is one of the important works in the history of biomedical science in this century. The role of liver regeneration and stem cells has been a hot topic. At present, stem cell transplantation is mainly focused on embryonic stem cells, bone marrow stem cells and so on. Because of the ethics, law, immune rejection and other problems, embryonic stem cells are difficult to be used in clinical practice. Autologous bone marrow derived hepatocyte transplantation as a new treatment for patients with liver failure has been paid attention to. Recent studies have shown that bone marrow mesenchymal stem cells (Mesenchymal stem cells,MSCs) have the potential to differentiate into nerve, blood, myocardium and hepatocytes, which has aroused great interest in the plasticity of bone marrow mesenchymal stem cells. Bone marrow-derived hepatocyte transplantation not only solves the difficulties of obtaining autologous liver cells, but also provides a platform for the study of liver regeneration tissue engineering. In order to explore the mechanism of transversely differentiation of bone marrow mesenchymal stem cells into hepatocytes, and to study the differentiation of bone marrow-derived hepatocytes in liver transplantation. Liver cells derived from induced bone marrow mesenchymal stem cells were transplanted into the liver of rats with hepatic fibrosis. The distribution and differentiation of liver cells were observed. The effect of the combination of Chinese medicine Ruangan decoction on the liver function of rats with hepatic fibrosis was observed. I. Firstly, bone marrow stem cells were extracted from the femur of SD rats. Bone marrow mesenchymal stem cells were isolated, cultured and amplified by Percoll density gradient centrifugation combined with adherent method in vitro. Bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs) of the third passage were identified by flow cytometry (FCM) detection of cell surface antigen (CD44,CD34,CD45,CD31,CD90,). Flow cytometry showed that CD34,CD45,CD31 was negative and CD44,CD90 was positive. These results indicate that bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs) that are not bone marrow hematopoietic cells are extracted, isolated and cultured. Bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs) of the third passage were planted in a six-well culture plate with a density of 1 脳 106/cm2, and the final concentration of hepatocyte growth factor (HGF) was 1.5 渭 g / ml, when the final concentration of 20ng/ml epidermal growth factor (EGF) was 1.5 渭 g / ml,. The differentiation of hepatocytes was induced and the morphologic changes of the cells were observed by inverted phase contrast microscope. The hepatocyte specific markers CK8,CK18 and albumin were detected by immunofluorescence. Among them, the cells detected the presence of CK8,CK18 and
【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2005
【分類號】：R329;R285

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本文編號：2408021