【摘要】： 研究目的： 利用屠宰黃牛卵巢，采集卵巢表面2～6mm卵泡卵母細(xì)胞， 1．研究人卵泡液作為牛卵母細(xì)胞體外成熟液的可行性； 2．研究人卵泡液滅活、培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)體積對牛卵母細(xì)胞體外成熟的影響； 3．研究在實驗室自配成熟液(常規(guī)成熟液)中添加阿魏酸鈉對牛卵母細(xì)胞體外成熟的影響。 研究方法： 1 291個未成熟牛卵母細(xì)胞隨機(jī)分為2組，分別采用人卵泡液和常規(guī)成熟液進(jìn)行成熟培養(yǎng)，比較兩種培養(yǎng)液的成熟率的差異。 2．1 724個未成熟牛卵母細(xì)胞隨機(jī)分為3組，常規(guī)成熟液為對照組，，滅活人卵泡液與不滅活人卵泡液作為實驗組，比較三組間成熟率的差異。 2．2 542個未成熟牛卵母細(xì)胞均采用人卵泡液為培養(yǎng)液，隨機(jī)分為4組，分別采用37.5℃、38℃、38.5℃、39℃培養(yǎng)，其余培養(yǎng)條件相同，比較4組間成熟率的差異。 2．3 478個個未成熟牛卵母細(xì)胞均采用人卵泡液為培養(yǎng)液，隨機(jī)分為2組，分別采用四孔板和常規(guī)微滴培養(yǎng)，比較兩組間成熟率的差異。 3 855個未成熟牛卵母細(xì)胞隨機(jī)分為4組，對照組為常規(guī)成熟液，其余三組為添加0.5mg／ml、1mg／ml、2mg／ml阿魏酸鈉的常規(guī)成熟液，培養(yǎng)條件均相同，比較四組間成熟率的差異。 研究結(jié)果： 1人卵泡液組與常規(guī)成熟液組成熟率分別為58.5％和63.5％，經(jīng)過統(tǒng)計學(xué)分析，兩組間成熟率差異沒有顯著性意義(P＞0.05)； 2．1常規(guī)成熟液培養(yǎng)為成熟牛卵母細(xì)胞，成熟率為64.7％，滅活卵泡液組成熟率為37.5％，不滅活卵泡液組成熟率為58.8％。滅活卵泡液組成熟率與對照組相比，差異有顯著性意義(P＜0.05)；不滅活卵泡液組成熟率與對照組相比，差異沒有顯著性意義(P＞0.05)。 2．2 37.5℃培養(yǎng)的牛卵母細(xì)胞成熟率為40.7％，38℃培養(yǎng)的牛卵母細(xì)胞成熟率為60.7％，38.5℃培養(yǎng)的牛卵母細(xì)胞成熟率為58.1％，39℃培養(yǎng)的牛卵母細(xì)胞成熟率為54.1％。37.5℃與38℃、38.5℃、39℃相比，成熟率差異均有顯著性意義(P＜0.05)；38℃、38.5℃、39℃三組間相比，成熟率間差異均沒有顯著性意義(P＞0.05)。 2．3四孔板培養(yǎng)牛卵母細(xì)胞，體外成熟率為62.1％，常規(guī)微滴培養(yǎng)牛卵母細(xì)胞，體外成熟率為65.0％，兩組比較，差異沒有顯著性意義(P＞0.05)。 3對照組成熟率為60.1％，含有0.5mg%qml阿魏酸鈉的常規(guī)成熟液成熟率為44.2％，與對照組相比，差異有顯著性意義(P＜0.05)。含有1mg／ml阿魏酸鈉的常規(guī)成熟液53.1％，與對照組相比，差異沒有顯著性意義(P＞0.05)。含有2mg／ml阿魏酸鈉的常規(guī)成熟液41.6％，與對照組相比，差異有顯著性意義(P＜0.05)。 研究結(jié)論： 1人成熟卵泡液對牛未成熟卵母細(xì)胞體外成熟有促進(jìn)作用，可以作為牛未成熟卵母細(xì)胞體外成熟培養(yǎng)液。 2．1人成熟卵泡液滅活可能會破壞人卵泡液中利于卵母細(xì)胞發(fā)育成熟的成分，造成卵母細(xì)胞成熟障礙，因此，采用人成熟卵泡液作為牛未成熟卵母細(xì)胞體外成熟培養(yǎng)液時，卵泡液無須滅活處理。 2．2采用人成熟卵泡液作為牛未成熟卵母細(xì)胞體外成熟培養(yǎng)液時，培養(yǎng)溫度設(shè)置在38℃比較合適。 2．3采用四孔板覆蓋礦物油培養(yǎng)卵母細(xì)胞使卵母細(xì)胞密度大且相對集中于培養(yǎng)皿的底部正中間，既有利于觀察，又有利于卵母細(xì)胞之間間隙連接，發(fā)揮其旁分泌作用，促進(jìn)卵母細(xì)胞發(fā)育，減少了培養(yǎng)器皿、培養(yǎng)液和試劑的消耗。另外卵母細(xì)胞周圍攜帶的大量顆粒細(xì)胞足夠滿足卵母細(xì)胞IVM的需要，不必另外收集和制備顆粒細(xì)胞，減少了污染細(xì)菌的機(jī)會，操作也大大簡化。 3含有1mg／ml阿魏酸鈉的常規(guī)成熟液對牛未成熟卵母細(xì)胞體外成熟沒有抑制作用。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：湖北中醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號】：R321-33

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本文編號：2402815