【摘要】： 疼痛是臨床上常見的癥狀,常給病人帶來極大的痛苦。有關痛覺過敏的發(fā)生機制,目前普遍認為主要是由于外周傷害性信息持續(xù)傳入,導致初級神經末梢釋放大量的神經遞質,這些遞質作用于脊髓后角次級神經元上相應受體,激活細胞內信號轉導過程,引起一氧化氮(nitric oxide, NO)產生增加以及蛋白激酶C(protein kinase, PKC)激活,二者可通過復雜的機制引起痛感受和痛覺過敏。 我室曾靜波[1,2]的研究發(fā)現,大鼠右后掌注射甲醛后能引起脊髓后角神經元一氧化氮合酶(Nitric oxide synthase, NOS)活性升高及NO產生增多。我室胡玉燕[3]近期的研究結果顯示,甲醛炎性痛可以誘導大鼠海馬神經元凋亡,側腦室注射NMDA受體拮抗劑MK-801可抑制甲醛炎性痛誘導的大鼠海馬神經元凋亡及凋亡相關基因的表達,提示,中樞內興奮性氨基酸(excitatory amino acids, EAAs)釋放及其受體的激活參與了傷害性信息傳入對大鼠海馬神經元凋亡的誘導。 傷害性信息傳入到脊髓引起的大量遞質釋放及其受體的過度激活是否也會引起脊髓神經元凋亡,在此過程NO生成增多是否在神經元凋亡中發(fā)揮作用,目前尚未見相關文獻報道。 因此,本實驗觀察了大鼠甲醛炎性痛時脊髓后角神經元凋亡的改變,并觀察了這一改變的時間特征。在此基礎上,進一步觀察了一氧化氮在甲醛炎性痛誘導大鼠脊髓后角神經元凋亡中的作用。 1甲醛炎性痛致大鼠脊髓神經元凋亡 方法健康雄性Sprague-Dawley大鼠30只,體重280±20克,隨機分為6組,分別為:對照組(control組),甲醛1d組(F 1d組),甲醛2d組(F 2d組),甲醛3 d組(F 3d組),甲醛4d組(F 4d組),甲醛7d組(F 7d組),每組5只動物。對照組不加任何處理,直接斷頭取材。足底注射甲醛1d、2d、3d、4d、7d組分別于大鼠右側足底注射0.2 ml 5%甲醛溶液致外周炎性痛后,立即計數1h內每5 min大鼠自發(fā)縮足次數,于相應時間點斷頭取材,采用流式細胞技術檢測L4～5脊髓節(jié)段神經元的凋亡率。 結果結果發(fā)現,足底注射甲醛可誘導大鼠產生一個雙相的自發(fā)痛反應,表現為嘶叫、自發(fā)性縮足,舔咬患爪等。大鼠第一時相痛反應在足底注射甲醛后立即出現,持續(xù)5~10 min;經過短暫間歇期(約5 min)出現第二時相疼痛反應,可持續(xù)40 min以上。 正常對照組大鼠L4～5脊髓節(jié)段神經元的凋亡率很低,與對照組相比,足底注射甲醛后1d時,神經元凋亡率即明顯增加(P0.05),3d時神經元凋亡率達高峰,注射甲醛后4d,大鼠L4～5脊髓節(jié)段神經元凋亡率有所降低,但仍高于對照組水平(P0.05),7d時神經元凋亡率基本恢復至正常水平。 結論結果表明,甲醛炎性痛可誘導大鼠脊髓神經元凋亡的發(fā)生,注射甲醛后3d凋亡達高峰,7d時基本恢復至正常水平。 2 NO在甲醛炎性痛誘導大鼠脊髓后角神經元凋亡中的作用 方法健康雄性Sprague-Dawley大鼠70只,體重280±20克,隨機分為7組,分別為正常對照組,鞘內注射L-精氨酸組(L-Arg組),甲醛組(F組),甲醛+鞘內注射生理鹽水組(F+NS組),甲醛+鞘內注射L-NAME 0.5μmol組(F+L-NAME 0.5μmol組)、甲醛+鞘內注射L-NAME 2μmol組(F+L-NAME 2μmol組)及甲醛+鞘內注射L-NAME 4μmol組(F+L-NAME 4μmol組)。各組均為10只動物,其中5只用于脊髓神經元凋亡率變化的觀察,5只用于觀察脊髓后角神經元p53蛋白的表達。正常對照組不加任何處理,直接斷頭取材; L-Arg組動物鞘內注射10μl L-Arg溶液(含4.7μmol L-Arg)后首先計數1h內縮足次數,12h時直接斷頭取材;甲醛+ NS組( F+NS )、甲醛+ L-NAME 0.5μmol組( F+L-NAME 0.5μmol )、甲醛+ L-NAME 2μmol組(F+L-NAME 2μmol)和甲醛+ L-NAME 4μmol組(F+L- NAME 4μmol)動物,于注射甲醛前分別鞘內注射10μl NS溶液和10μl L-NAME溶液(分別含0.5μmol、2μmol、4μmol L-NAME),于注射甲醛后,首先計數1 hour內縮足次數,然后于注射甲醛后3d斷頭取材。采用流式細胞技術檢測脊髓神經元凋亡率,應用免疫組織化學方法觀察脊髓后角神經元p53蛋白的表達。 結果結果發(fā)現:鞘內注射L-Arg溶液后,動物出現了嘶叫,煩躁不安,易激惹現象,表明動物出現了傷害性反應。動物足低注射甲醛后立即出現嘶叫,縮足,舔咬注射部位等自發(fā)痛反應行為。F組與F+NS兩組之間相比,第一相和第二相每5分鐘的縮足次數均無顯著性差異。甲醛+不同劑量L-NAME(0.5μmol、2μmol、4μmol)組動物鞘內注射L-NAME后,可劑量依賴性抑制甲醛誘導的傷害性反應,表現為第一、二相自發(fā)縮足次數顯著降低(P0.01)。 L-Arg組脊髓神經元凋亡率高于對照組水平。F組及F+NS組脊髓神經元凋亡率均明顯高于對照組(P0.05),但兩組之間無顯著性差異。與F+NS組相比,F+ L-NAME 0.5μmol組、F+L-NAME 2μmol和F+L-NAME 4μmol組L4～5脊髓節(jié)段神經元的凋亡率均明顯降低,L-NAME劑量越大,神經元的凋亡率降低越顯著。 Control組大鼠L4～5脊髓后角可見少量散在的p53免疫反應陽性細胞,p53免疫反應陽性細胞胞體多為橢圓形或不規(guī)則三角形,周圍有明顯的突起和纖維,符合神經元特征。這些細胞染色較淺,左右兩側無明顯差異;與control組相比,L-Arg組脊髓后角神經元Ⅰ~Ⅱ板層p53免疫反應陽性細胞數目明顯增加,染色加深;與control組相比,F組及F+NS組大鼠注射側脊髓后角神經元Ⅰ~Ⅱ板層、Ⅲ~Ⅵ板層p53陽性細胞數量明顯增加(P0.05),染色明顯加深,即灰度值明顯降低(P0.05),注射同側脊髓后角內p53陽性細胞數量及染色深度均高于對側(P0.05),相同側相比,兩組之間無顯著性差異。與F+NS組相比,甲醛+L-NAME各劑量組脊髓后角神經元p53陽性細胞數量和陽性細胞染色深度均明顯降低,L-NAME的劑量越大,其陽性細胞的數量及染色深度的降低程度越明顯。 以上結果表明,鞘內注射L-Arg可使正常大鼠出現自發(fā)痛反應,可引起大鼠脊髓后角神經元p53蛋白表達增加并誘導神經元凋亡;預先鞘內注射L-NAME,可劑量依賴性抑制甲醛炎性痛誘導的大鼠脊髓神經元凋亡及脊髓后角神經元p53蛋白的表達,提示炎性痛時脊髓后角NOS的活性增強以及NO生成過多參與了神經元凋亡的誘導過程。本實驗還證實,促進p53蛋白表達可能是NO誘導脊髓后角神經元凋亡的重要環(huán)節(jié)之一。 結論甲醛炎性痛可誘導大鼠脊髓神經元凋亡,注射甲醛后3d神經元凋亡達高峰。炎性痛時脊髓后角NO產生增多參與了神經元凋亡的誘導過程。促進p53蛋白表達可能是NO誘導脊髓后角神經元凋亡的重要環(huán)節(jié)之一。
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【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2007
【分類號】：R363

【引證文獻】

相關期刊論文 前1條

1 未小明;李寬;祁文秀;;不同劑量的一氧化氮對福爾馬林炎性痛大鼠脊髓背角Bcl-2/Bax表達的影響[J];神經解剖學雜志;2011年01期

相關碩士學位論文 前1條

1 李寬;不同劑量的一氧化氮對福爾馬林致大鼠炎性行為痛反應及脊髓背角Bcl-2/Bax表達的影響[D];山西醫(yī)科大學;2010年

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本文編號：2393102