【摘要】：目的 通過觀察豬肝細(xì)胞的功能和形態(tài)學(xué)特征，探討一種三維擬生態(tài)培養(yǎng)網(wǎng)片用于豬肝細(xì)胞高密度培養(yǎng)的可行性。 方法 采用兩步法分離乳豬肝細(xì)胞，，使用由美國Cordlife公司生產(chǎn)的以一種三維擬生態(tài)培養(yǎng)網(wǎng)片為基礎(chǔ)的細(xì)胞培養(yǎng)裝置進(jìn)行乳豬肝細(xì)胞培養(yǎng)，共進(jìn)行肝細(xì)胞培養(yǎng)試驗4次，于培養(yǎng)開始后0、2、4、6、8小時觀察培養(yǎng)液中各項生化指標(biāo)、白蛋白、安定和尿素氮的濃度以及培養(yǎng)裝置進(jìn)出口氧分壓差的變化，分析O-2、2-4、4-6、6-8小時段安定清除率和尿素合成率的變化，觀察肝細(xì)胞在培養(yǎng)網(wǎng)片中的形態(tài)學(xué)特征。 結(jié)果 以培養(yǎng)開始后不同時間分組，分為0、2、4、6、8小時組，各組之間培養(yǎng)液中谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、乳酸脫氫酶、總膽紅素濃度以及培養(yǎng)裝置進(jìn)出口氧分壓差的均數(shù)無明顯差異(P＞0.05)，尿素氮和安定濃度的均數(shù)存在明顯差異(P＜0.05)；以不同時間段分組，分為0-2、2-4、4-6、6-8小時組，各組之間尿素氮合成率和安定清除率存在明顯差異(P＜0.05)，隨著時間的延長而有所下降；倒置相差顯微鏡下可觀察到肝細(xì)胞典型的形態(tài)學(xué)特征。肝細(xì)胞在培養(yǎng)網(wǎng)片中的培養(yǎng)密度達(dá)到了10~7/ml。 結(jié)論 生長在培養(yǎng)網(wǎng)片中的肝細(xì)胞保持了穩(wěn)定的生化活性、良好的物質(zhì)轉(zhuǎn)化代謝能力和生物合成能力、典型的細(xì)胞生理代謝特點和生長形態(tài)學(xué)特征，該培養(yǎng)網(wǎng)片能為肝細(xì)胞提供更接近體內(nèi)的培養(yǎng)環(huán)境，實現(xiàn)了肝細(xì)胞的高密度和高活性培養(yǎng)。今后可進(jìn)一步探討以此培養(yǎng)網(wǎng)片為基礎(chǔ)構(gòu)建一種新的肝細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)，以及其應(yīng)用于生物人工肝的研究。
[Abstract]:Objective to observe the function and morphological characteristics of porcine hepatocytes and to explore the feasibility of using a three-dimensional ecologically cultured mesh for high density culture of porcine hepatocytes. Methods the porcine hepatocytes were isolated by two steps method. The hepatocytes were cultured with a three dimensional ecological culture mesh device produced by Cordlife Company of USA. The hepatocyte culture experiments were carried out for 4 times. The changes of biochemical indexes, concentration of albumin, diazepam and urea nitrogen, and the difference of oxygen partial pressure between the inlet and outlet of the culture unit were observed at 0 ~ 2 ~ 4 ~ 4 ~ 6 ~ (-1) h after culture. The changes of diazepam clearance rate and urea synthesis rate in 6-8 hours of O-2O2-4O4-6-6 were analyzed, and the morphological characteristics of hepatocytes in cultured mesh were observed. Results according to the different time groups after culture, they were divided into two groups, one group was treated with alanine aminotransferase (alt), the other was aspartate aminotransferase (AST) and lactate dehydrogenase (lactate dehydrogenase). There was no significant difference in the concentration of total bilirubin and the difference of oxygen partial pressure (P > 0.05), but there was significant difference between the concentration of urea nitrogen and diazepam (P < 0.05). There were significant differences in urea nitrogen synthesis rate and diazepam clearance rate between groups (P < 0.05). Typical morphological features of hepatocytes can be observed under inverted phase contrast microscope. The density of hepatocytes in the cultured mesh was 10 7 / ml. Conclusion the hepatocytes growing in the cultured meshes maintain stable biochemical activity, good ability of substance transformation, metabolism and biosynthesis, typical characteristics of cell physiological metabolism and growth morphology. This culture mesh can provide a more close culture environment for hepatocytes and achieve the high density and high activity of hepatocytes. In the future, a new hepatocyte culture system based on the culture mesh can be further explored, and its application to bioartificial liver can be studied.
【學(xué)位授予單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類號】：R329

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本文編號：2388129