【摘要】：目的 通過(guò)觀察豬肝細(xì)胞的功能和形態(tài)學(xué)特征，探討一種三維擬生態(tài)培養(yǎng)網(wǎng)片用于豬肝細(xì)胞高密度培養(yǎng)的可行性。 方法 采用兩步法分離乳豬肝細(xì)胞，，使用由美國(guó)Cordlife公司生產(chǎn)的以一種三維擬生態(tài)培養(yǎng)網(wǎng)片為基礎(chǔ)的細(xì)胞培養(yǎng)裝置進(jìn)行乳豬肝細(xì)胞培養(yǎng)，共進(jìn)行肝細(xì)胞培養(yǎng)試驗(yàn)4次，于培養(yǎng)開(kāi)始后0、2、4、6、8小時(shí)觀察培養(yǎng)液中各項(xiàng)生化指標(biāo)、白蛋白、安定和尿素氮的濃度以及培養(yǎng)裝置進(jìn)出口氧分壓差的變化，分析O-2、2-4、4-6、6-8小時(shí)段安定清除率和尿素合成率的變化，觀察肝細(xì)胞在培養(yǎng)網(wǎng)片中的形態(tài)學(xué)特征。 結(jié)果 以培養(yǎng)開(kāi)始后不同時(shí)間分組，分為0、2、4、6、8小時(shí)組，各組之間培養(yǎng)液中谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、乳酸脫氫酶、總膽紅素濃度以及培養(yǎng)裝置進(jìn)出口氧分壓差的均數(shù)無(wú)明顯差異(P＞0.05)，尿素氮和安定濃度的均數(shù)存在明顯差異(P＜0.05)；以不同時(shí)間段分組，分為0-2、2-4、4-6、6-8小時(shí)組，各組之間尿素氮合成率和安定清除率存在明顯差異(P＜0.05)，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)而有所下降；倒置相差顯微鏡下可觀察到肝細(xì)胞典型的形態(tài)學(xué)特征。肝細(xì)胞在培養(yǎng)網(wǎng)片中的培養(yǎng)密度達(dá)到了10~7/ml。 結(jié)論 生長(zhǎng)在培養(yǎng)網(wǎng)片中的肝細(xì)胞保持了穩(wěn)定的生化活性、良好的物質(zhì)轉(zhuǎn)化代謝能力和生物合成能力、典型的細(xì)胞生理代謝特點(diǎn)和生長(zhǎng)形態(tài)學(xué)特征，該培養(yǎng)網(wǎng)片能為肝細(xì)胞提供更接近體內(nèi)的培養(yǎng)環(huán)境，實(shí)現(xiàn)了肝細(xì)胞的高密度和高活性培養(yǎng)。今后可進(jìn)一步探討以此培養(yǎng)網(wǎng)片為基礎(chǔ)構(gòu)建一種新的肝細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)，以及其應(yīng)用于生物人工肝的研究。
[Abstract]:Objective to observe the function and morphological characteristics of porcine hepatocytes and to explore the feasibility of using a three-dimensional ecologically cultured mesh for high density culture of porcine hepatocytes. Methods the porcine hepatocytes were isolated by two steps method. The hepatocytes were cultured with a three dimensional ecological culture mesh device produced by Cordlife Company of USA. The hepatocyte culture experiments were carried out for 4 times. The changes of biochemical indexes, concentration of albumin, diazepam and urea nitrogen, and the difference of oxygen partial pressure between the inlet and outlet of the culture unit were observed at 0 ~ 2 ~ 4 ~ 4 ~ 6 ~ (-1) h after culture. The changes of diazepam clearance rate and urea synthesis rate in 6-8 hours of O-2O2-4O4-6-6 were analyzed, and the morphological characteristics of hepatocytes in cultured mesh were observed. Results according to the different time groups after culture, they were divided into two groups, one group was treated with alanine aminotransferase (alt), the other was aspartate aminotransferase (AST) and lactate dehydrogenase (lactate dehydrogenase). There was no significant difference in the concentration of total bilirubin and the difference of oxygen partial pressure (P > 0.05), but there was significant difference between the concentration of urea nitrogen and diazepam (P < 0.05). There were significant differences in urea nitrogen synthesis rate and diazepam clearance rate between groups (P < 0.05). Typical morphological features of hepatocytes can be observed under inverted phase contrast microscope. The density of hepatocytes in the cultured mesh was 10 7 / ml. Conclusion the hepatocytes growing in the cultured meshes maintain stable biochemical activity, good ability of substance transformation, metabolism and biosynthesis, typical characteristics of cell physiological metabolism and growth morphology. This culture mesh can provide a more close culture environment for hepatocytes and achieve the high density and high activity of hepatocytes. In the future, a new hepatocyte culture system based on the culture mesh can be further explored, and its application to bioartificial liver can be studied.
【學(xué)位授予單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類(lèi)號(hào)】：R329

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 王珂;徐建敏;華玉明;王京立;;紅景天苷誘導(dǎo)人胎盤(pán)間充質(zhì)干細(xì)胞分化為肝細(xì)胞樣細(xì)胞[J];江蘇醫(yī)藥;2011年15期

2 楊天燕;賴(lài)靜;韋錦斌;;小鼠原代肝細(xì)胞的分離與培養(yǎng)[J];內(nèi)科;2011年05期

3 張傳山;李朝旺;范金亮;李靜;呂國(guó)棟;王俊華;盧曉梅;溫浩;林仁勇;;多房棘球絳蟲(chóng)原頭蚴對(duì)體外培養(yǎng)宿主肝細(xì)胞MAPK信號(hào)通路影響的初步研究[J];中國(guó)病原生物學(xué)雜志;2011年08期

4 李科;劉明華;;癌胚抗原相關(guān)細(xì)胞黏附分子6蛋白在肝細(xì)胞癌組織中的表達(dá)及臨床意義[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2011年17期

5 戴虹;何貴清;黃學(xué)惠;陳一暉;王超秀;李武;;原代大鼠肝細(xì)胞分離與純化方法[J];昆明醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2011年07期

6 孫素玲;周源;劉森;余百喬;;偏釩酸銨對(duì)小鼠血清和肝臟轉(zhuǎn)氨酶活力的影響[J];生態(tài)毒理學(xué)報(bào);2011年04期

7 羅慧英;劉淵;楊煥;;肉蓯蓉總苷對(duì)原代培養(yǎng)小鼠肝細(xì)胞酒精損傷保護(hù)作用研究[J];中國(guó)臨床藥理學(xué)與治療學(xué);2011年08期

8 方德寶;余宏鑄;許業(yè)傳;姚佳明;花香;王歡;;前列腺素E_1對(duì)梗阻性黃疸大鼠肝細(xì)胞凋亡及相關(guān)基因Bax/Bcl-2表達(dá)的影響[J];安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2011年08期

9 李靜;鐘進(jìn)義;綦曉;尹衍玲;;葡萄原花青素對(duì)乙醇誘發(fā)小鼠肝細(xì)胞增殖活性損傷的防護(hù)作用[J];青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2011年04期

10 丁秋瑾;劉康;劉保林;;胰島素抵抗細(xì)胞模型的研究進(jìn)展[J];海峽藥學(xué);2011年07期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 朱連勤;馬小明;呂翠;常順華;隋菲菲;;玉米赤霉烯酮染毒培養(yǎng)基中添加酯化葡甘露聚糖對(duì)肝細(xì)胞生長(zhǎng)和代謝的影響[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家畜內(nèi)科學(xué)分會(huì)2009年學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2009年

2 李蘭娟;章益民;李君;盛國(guó)平;俞海英;;BALB／c裸鼠脾內(nèi)移植人源性肝細(xì)胞HepLL的生物學(xué)特性[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十二次全國(guó)病毒性肝炎及肝病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2005年

3 楊帆;王春景;蘇曉玲;顧蓓;張宏;劉玉琴;;人胚胎肝細(xì)胞的體外培養(yǎng)及表型觀察[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)病理學(xué)分會(huì)2006年學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2006年

4 葉明;樂(lè)美兆;李元敏;涂頻;李桂梅;;核內(nèi)假包涵體是肝細(xì)胞和癌細(xì)胞的天然殺手——自噬性細(xì)胞死亡的一種方式[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)病理學(xué)分會(huì)2006年學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2006年

5 李永塘;侯永清;丁斌鷹;劉玉蘭;朱慧玲;劉堅(jiān);王蕾;;α-酮戊二酸對(duì)免疫應(yīng)激斷奶仔豬肝細(xì)胞損傷的影響[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)分會(huì)第十次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2008年

6 陳永平;林海龍;鄭明華;潘珍珍;王鳳玲;馬海龍;;睪丸支持細(xì)胞與肝細(xì)胞混合共微囊化移植治療大鼠急性肝衰竭[A];第十七次全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合肝病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2008年

7 孫荷;董學(xué)君;張卉;張國(guó)榮;邵健忠;項(xiàng)黎新;;HGF和FGF4在誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向肝細(xì)胞分化中的作用[A];全國(guó)臨床免疫檢驗(yàn)研討會(huì)暨第六屆全國(guó)臨床免疫學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2009年

8 黃月紅;陳運(yùn)新;張莉娟;陳治新;王小眾;;大鼠白介素10真核表達(dá)質(zhì)粒在體內(nèi)外大鼠肝細(xì)胞中的表達(dá)及影響[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第12次全國(guó)內(nèi)科學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2009年

9 許爛漫;陳永平;黃瑜;王曉東;高峰;;微囊化肝細(xì)胞移植對(duì)急性肝衰竭大鼠肝再生的影響[A];第二屆傳染病診治高峰論壇暨2009年浙江省感染病、肝病學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2009年

10 汪洪姣;徐志偉;陳均亞;林海龍;陳益平;陳永平;;微囊化肝細(xì)胞移植治療暴發(fā)性肝衰竭大鼠的療效觀察[A];第六屆江浙滬兒科學(xué)術(shù)會(huì)議暨兒科學(xué)基礎(chǔ)與臨床研究進(jìn)展學(xué)術(shù)班論文匯編[C];2009年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 解放軍302醫(yī)院臨床檢驗(yàn)中心主任技師 毛遠(yuǎn)麗;肝細(xì)胞是否受損看哪項(xiàng)[N];健康報(bào);2005年

2 王小龍;科學(xué)家發(fā)現(xiàn)保護(hù)肝細(xì)胞的蛋白質(zhì)[N];科技日?qǐng)?bào);2009年

3 毛遠(yuǎn)麗;專(zhuān)家教您學(xué)看化驗(yàn)單[N];農(nóng)村醫(yī)藥報(bào)（漢）;2008年

4 應(yīng)莉;長(zhǎng)期飲酒易致肝細(xì)胞基因表達(dá)適應(yīng)性改變[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2009年

5 毛遠(yuǎn)麗;哪些檢查用來(lái)探查肝細(xì)胞是否受損[N];農(nóng)村醫(yī)藥報(bào)（漢）;2007年

6 毛遠(yuǎn)麗;哪些檢查常用來(lái)探查肝細(xì)胞是否受損[N];家庭醫(yī)生報(bào);2007年

7 黃顯斌;我完成首例肝細(xì)胞體內(nèi)移植術(shù)[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2004年

8 ;首例肝細(xì)胞移植手術(shù)獲成功[N];科技日?qǐng)?bào);2004年

9 王振坤;什么是肝細(xì)胞移植[N];家庭醫(yī)生報(bào);2008年

10 胥金章　黃顯斌;我國(guó)首例肝細(xì)胞移植手術(shù)獲得成功[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2004年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 劉慧;羊水來(lái)源干細(xì)胞的生物學(xué)特性分析及其向肝細(xì)胞誘導(dǎo)分化的實(shí)驗(yàn)研究[D];中國(guó)人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2009年

2 任秉新;大菱鲆（Scophthalmus maximus）肝細(xì)胞體外培養(yǎng)、紅體病虹彩病毒體外繁殖條件及病毒疫苗研制的研究[D];中國(guó)海洋大學(xué);2009年

3 邢同海;生物人工肝的構(gòu)建及其在肝移植圍手術(shù)期的應(yīng)用[D];復(fù)旦大學(xué);2004年

4 崔永澤;一氧化氮對(duì)大鼠梗阻性黃疸桿細(xì)胞凋亡的影響及其機(jī)制[D];吉林大學(xué);2004年

5 馬軍;大鼠骨髓細(xì)胞向肝細(xì)胞轉(zhuǎn)化的體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)研究[D];鄭州大學(xué);2002年

6 常冰梅;多種基因工程體系表達(dá)人肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子的研究和評(píng)價(jià)及基因治療的實(shí)驗(yàn)初探[D];山西醫(yī)科大學(xué);2004年

7 馬秀玲;精氨酸對(duì)肝臟IGF-1分泌的調(diào)控及其促進(jìn)免疫作用機(jī)制的研究[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2003年

8 吳靜;肝細(xì)胞核因子（-1β,-4α,-1α）與2型糖尿病關(guān)系的研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2002年

9 李英賢;肝細(xì)胞生成素生物學(xué)作用的調(diào)控機(jī)制研究[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2003年

10 李齊根;肝細(xì)胞癌復(fù)發(fā)歸巢機(jī)制的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)觀察[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2004年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 黃瑤;肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子對(duì)牛視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞的促增殖移行效應(yīng)[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2004年

2 李文靜;肝細(xì)胞生成素（HPO）在肝癌細(xì)胞侵襲性生長(zhǎng)中的作用[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2003年

3 張紅芝;翻白草降糖作用及對(duì)肝細(xì)胞糖代謝影響的研究[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué);2005年

4 范寧;氧化應(yīng)激對(duì)仔豬肝細(xì)胞中AMPK活性的影響[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2005年

5 朱強(qiáng);SD大鼠肝細(xì)胞、Kupffer細(xì)胞分離與培養(yǎng)/共同培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)研究[D];昆明醫(yī)學(xué)院;2005年

6 趙慧茹;櫟精對(duì)葡萄糖-6-磷酸酶基因表達(dá)和活性的影響[D];天津醫(yī)科大學(xué);2006年

7 艾小江;三維擬生態(tài)網(wǎng)片用于豬肝細(xì)胞高密度培養(yǎng)的可行性研究[D];暨南大學(xué);2006年

8 胡泉;基于SC和肝細(xì)胞三維共培養(yǎng)構(gòu)建組織工程化肝臟片層的實(shí)驗(yàn)研究[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2009年

9 周華麗;長(zhǎng)期酒精攝入對(duì)大鼠肝細(xì)胞凋亡與增殖的影響[D];浙江大學(xué);2003年

10 邊曉慧;肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子對(duì)大鼠腎小球系膜細(xì)胞表達(dá)基質(zhì)金屬蛋白酶-2，-9的影響[D];中國(guó)醫(yī)科大學(xué);2004年

本文編號(hào)：2388129