【摘要】：第一部分 外源性雙歧桿菌對(duì)小鼠 腸道樹(shù)突狀細(xì)胞數(shù)量的影響研究 目的: 通過(guò)雙歧桿菌(bifidobacterium,Bif.)對(duì)小鼠腸道樹(shù)突狀細(xì)胞(Dendritic Cell,DC)數(shù)量的影響研究,探討 Bif.在體內(nèi)對(duì) DC 分化、發(fā)育的作用,為探索二者的黏膜免疫功能奠定基礎(chǔ)。 方法: 隨機(jī)將 4-5 周齡 36 只 Balb/c 小鼠分成四組,分別為活菌組死菌組耗盡培養(yǎng)上清(Spent culture supernatant,SCS)組陰性對(duì)照組,每組 9 只。各組分別采用活雙歧桿菌菌液(1×109CFU/ml )、滅活雙歧桿菌菌液(1×109CFU/ml )、雙歧桿菌 SCS、無(wú)菌生理鹽水灌胃,均為 0.5ml/只.天,連續(xù) 7 天。于實(shí)驗(yàn)第 9 天處死小鼠,取小腸空、回腸段,做冰凍切片, SP 免疫組織化學(xué)法分析檢測(cè)腸道 DC 數(shù)量。 結(jié)果: 小腸標(biāo)本肉眼觀(guān)察無(wú)充血、腫脹等病理現(xiàn)象。切片在高倍鏡下見(jiàn)組織完整。SP免疫組化方法染色后見(jiàn)DC胞漿及胞膜呈棕黃色,分布于整個(gè)空、回腸的黏膜固有層。細(xì)胞大小不一,外形不規(guī)則,胞核外形亦不規(guī)則,多數(shù)呈偏心位,且 DC 有不規(guī)則突起,與周?chē)?xì)胞有緊密的接觸。計(jì)數(shù)發(fā)現(xiàn),雙歧桿菌灌胃后小鼠小腸黏膜固有層 DC數(shù)量增加(p0.05),以活菌組作用最明顯,死菌組次之,培養(yǎng)上清組作用最弱,經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理有顯著差異(p0.05)。 結(jié)論: 外源性雙歧桿菌能增加小鼠小腸黏膜固有層中 DC 的數(shù)量, 重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文 4 活菌作用最明顯。提示雙歧桿菌通過(guò)胃腸道途徑可能影響 DC 的分化、 發(fā)育;對(duì) DC 的作用可能就是雙歧桿菌影響機(jī)體免疫功能的重要環(huán)節(jié); 且保持活菌狀態(tài)對(duì)機(jī)體免疫有重要作用。 關(guān)鍵詞:雙歧桿菌,樹(shù)突狀細(xì)胞,小鼠,腸道 重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文 5 第二部分 雙歧桿菌對(duì)單核細(xì)胞來(lái)源的樹(shù)突狀細(xì)胞 成熟及功能影響的體外研究 目的: 研究雙歧桿菌對(duì)正常成年人外周血單核細(xì)胞來(lái)源的 DC 刺 激淋巴細(xì)胞增殖功能及分泌細(xì)胞因子的影響,進(jìn)一步探討雙歧桿菌在 體外對(duì) DC 分化、成熟及功能的作用。 方法:采用淋巴細(xì)胞分離液(Ficoll 液)分離正常成年人外周 血單個(gè)核細(xì)胞(Peripheral blood monocular cell,PBMC),貼壁培 養(yǎng)獲得單核細(xì)胞,(1)單獨(dú)加入熱滅活雙歧桿菌,倒置光學(xué)顯微鏡觀(guān) 察單核細(xì)胞形態(tài)是否發(fā)生改變,能否誘導(dǎo)成為 DC;(2)以 GM-CSF、 IL-4 聯(lián)合誘導(dǎo)單核細(xì)胞生成未成熟 DC,實(shí)驗(yàn)組在培養(yǎng)的第 7 天分別 加入不同劑量(100ug/ml 、10ug/ml)熱滅活的雙歧桿菌,陰性對(duì)照 組不加,陽(yáng)性對(duì)照組加入 1ug/ml 的脂多糖(Lipopolysaccharide, LPS),通過(guò)倒置光學(xué)顯微鏡、透射電鏡、掃描電鏡觀(guān)察,于培養(yǎng)第 9 天檢測(cè) DC 刺激同種異體 T 淋巴細(xì)胞的增殖情況,ELISA 法檢測(cè) DC 培 養(yǎng)上清中 IL-12、DC 與淋巴細(xì)胞混合培養(yǎng)上清中 IFN-γ的分泌,以 確定雙歧桿菌在體外對(duì) DC 成熟程度及功能的影響。 結(jié)果:(1)單用熱滅活的雙歧桿菌誘導(dǎo),單核細(xì)胞形態(tài)沒(méi)有發(fā)生 改變;(2) GM-CSF、IL-4 加雙歧桿菌誘導(dǎo)單核細(xì)胞,形態(tài)學(xué)鑒定可 獲得具有典型樹(shù)突狀突起形態(tài)的 DC,誘導(dǎo)后的 DC 刺激同種異體 T 淋 巴細(xì)胞增殖的能力明顯增強(qiáng)(p0.01),高劑量組刺激能力最強(qiáng)。培 養(yǎng)上清液中檢測(cè)到各組 DC 分泌的 IL-12 均與陰性對(duì)照組有統(tǒng)計(jì)學(xué)上 的差異(p0.05),高劑量雙歧桿菌誘導(dǎo)的 DC 分泌 IL-12 的水平最高, 兩兩比較,低劑量雙歧桿菌組與 LPS 組分泌 IL-12 的水平相當(dāng) (p0.05)。雙歧桿菌和 LPS 誘導(dǎo)的 DC 刺激淋巴細(xì)胞分泌 IFN-γ的水
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【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2005
【分類(lèi)號(hào)】：R392

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前4條

1 童華生;細(xì)胞因子對(duì)樹(shù)突狀細(xì)胞體外培養(yǎng)的影響[J];江西醫(yī)學(xué)檢驗(yàn);2002年02期

2 朱學(xué)軍,劉志紅,黃海東,劉棟,黎磊石;人脾臟樹(shù)突狀細(xì)胞大量培養(yǎng)的新方法[J];腎臟病與透析腎移植雜志;2001年02期

3 朱學(xué)軍,曹雪濤,于益芝,陳國(guó)友,萬(wàn)濤,馬施華,唐華,章衛(wèi)平;人外周血樹(shù)突狀細(xì)胞的體外擴(kuò)增及鑒定[J];中國(guó)腫瘤生物治療雜志;1997年04期

4 樓國(guó)良,王全興,陳國(guó)友,丁國(guó)善,厲永建,劉玉杉,張明,孫文佶,曹雪濤;可溶性TNF受體基因修飾的樹(shù)突狀細(xì)胞誘導(dǎo)抗原特異性腫瘤免疫耐受的機(jī)理[J];中國(guó)腫瘤生物治療雜志;2001年02期

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本文編號(hào)：2370250