【摘要】：目的:探討培養(yǎng)人股骨頭骨微血管內(nèi)皮細(xì)胞分離培養(yǎng)方法。方法:2013年10月至2014年1月15例行髖關(guān)節(jié)置換患者切除的內(nèi)部無病變的股骨頭,男2例,女13例;年齡38~92歲,平均71.2歲。無菌條件下將股骨頭內(nèi)松質(zhì)骨咬成碎骨粒,放入培養(yǎng)基。采用酶消化法,密度梯度離心法分離細(xì)胞;差速貼壁法,選擇性培養(yǎng)基法純化細(xì)胞。倒置顯微鏡觀察細(xì)胞特點(diǎn),并采用vWF、CD31免疫熒光進(jìn)行細(xì)胞鑒定。結(jié)果:原代培養(yǎng)24 h后倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞數(shù)量與患者年齡呈正相關(guān),年齡越大細(xì)胞越少。培養(yǎng)4~5 d細(xì)胞呈短梭形、多角形或"鵝卵石"狀。培養(yǎng)7~10 d細(xì)胞生長密集,細(xì)胞融合呈漩渦狀,接觸抑制明顯。vWF、CD31免疫熒光檢測陽性率100%,表明細(xì)胞為骨微血管內(nèi)皮細(xì)胞。結(jié)論:人股骨頭骨微血管內(nèi)皮細(xì)胞分離培養(yǎng)方法簡單、穩(wěn)定、有效、可重復(fù)性好,可以獲得純度較高的股骨頭骨微血管內(nèi)皮細(xì)胞。
[Abstract]:Objective: to investigate the method of isolation and culture of human femoral head microvascular endothelial cells. Methods: from October 2013 to January 2014, 15 patients (2 males and 13 females) were treated with hip arthroplasty. The average age was 71.2 years (38 / 92). The cancellous bone in the femoral head was bitten into broken bone under aseptic condition and put into culture medium. The cells were isolated by enzyme digestion and density gradient centrifugation, and purified by differential adhesion method and selective medium method. The characteristics of cells were observed by inverted microscope and identified by vWF,CD31 immunofluorescence. Results: after 24 hours of primary culture, the number of cells observed under inverted microscope was positively correlated with the patient's age, and the older the cells were, the less the cells were. The cells were short fusiform, polygonal or cobblestone. After 7 days of culture, the cells grew dense, the cell fusion was whirlpool and the contact inhibition was obvious. The positive rate of vWF,CD31 immunofluorescence was 100, which indicated that the cells were bone microvascular endothelial cells. Conclusion: the method of isolation and culture of human femoral head microvascular endothelial cells is simple, stable, effective and reproducible.
【作者單位】： 中日友好醫(yī)院骨關(guān)節(jié)外科;北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院研究生院;中日友好醫(yī)院臨床醫(yī)學(xué)研究所;
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項目(編號:81273972)~~
【分類號】：R329.2

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 童培建;肖魯偉;季衛(wèi)鋒;田琨;;脂質(zhì)代謝及破骨細(xì)胞活性在激素性股骨頭壞死塌陷發(fā)生過程中的作用研究[J];中國骨傷;2009年02期

2 童培建;胡柏松;金紅婷;李陶冶;方相;;右歸飲對激素性股骨頭壞死大鼠體外誘導(dǎo)培養(yǎng)成骨細(xì)胞作用的研究[J];中國骨傷;2010年01期

3 王佰亮;李子榮;婁晉寧;葉麗亞;張文建;;淫羊藿苷對糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)的骨微血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷的保護(hù)作用[J];中國微循環(huán);2009年06期

【共引文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 張王華;王峰;;中藥內(nèi)治法治療股骨頭缺血性壞死研究進(jìn)展[J];中醫(yī)藥臨床雜志;2012年05期

2 馬凌風(fēng);;威靈壯骨膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J];科技創(chuàng)新與應(yīng)用;2013年09期

3 陳鎮(zhèn)秋;何偉;魏秋實;;股骨頭壞死中醫(yī)證型與血液學(xué)指標(biāo)的相關(guān)性研究[J];中華中醫(yī)藥雜志;2013年07期

4 黃杰浩;吳科鋒;曾惠敏;;中藥防治激素性骨質(zhì)疏松致股骨頭壞死機(jī)制的研究進(jìn)展[J];廣東醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2013年05期

5 朱振康;李陶冶;杜文喜;蔡運(yùn)火;童培建;;右歸飲對類固醇激素性股骨頭壞死大鼠成骨-破骨體外共育體系中破骨細(xì)胞分化的影響[J];中華骨質(zhì)疏松和骨礦鹽疾病雜志;2013年04期

6 邱進(jìn)俊;劉園園;王玉;劉承美;;可注射骨組織工程支架材料[J];高分子通報;2014年02期

7 韋標(biāo)方;;病灶清除自體骨聯(lián)合自骨化磷酸鈣人工骨植入治療早期非創(chuàng)傷性股骨頭壞死[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2014年08期

8 徐濤濤;金紅婷;廖菲;童培建;吳承亮;;右歸飲含藥血清促進(jìn)人血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖及抗氧化損傷的作用研究[J];浙江中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報;2014年08期

9 蓋自寬;蘇敬陽;侯勇;程忠俠;牛素楨;;仙靈骨葆預(yù)防股骨頸骨折愈后再發(fā)股骨頭壞死療效觀察[J];河北醫(yī)藥;2012年12期

10 楊杰;王義生;;仙靈骨葆膠囊預(yù)防激素性股骨頭壞死43例[J];鄭州大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2011年02期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前8條

1 劉文剛;CYP3A酶在激素性股骨頭壞死發(fā)病中的作用及健骨方對其影響的實驗研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2011年

2 吳淮;補(bǔ)腎活血祛痰法預(yù)防兔激素性股骨頭壞死的實驗研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2010年

3 魏秋實;股骨頭壞死證候?qū)W及中醫(yī)藥治療適應(yīng)癥的規(guī)范化研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2012年

4 李慧英;淫羊藿干預(yù)激素性股骨頭壞死實驗研究[D];鄭州大學(xué);2013年

5 張連成;TEM8與uPA的相互作用及其生物學(xué)意義研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2013年

6 袁超凡;多孔鈦合金支撐棒對早期距骨骨壞死骨修復(fù)的影響[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2013年

7 鄭志永;酒精性股骨頭骨壞死的證候?qū)W研究[D];山東中醫(yī)藥大學(xué);2013年

8 劉立萍;基于JNK、p38/Smads信號級聯(lián)研究左歸丸含藥血清對MC3T3-E1細(xì)胞的調(diào)控機(jī)制[D];遼寧中醫(yī)藥大學(xué);2013年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 申子龍;骨髓干細(xì)胞和傘狀支撐骨移植術(shù)治療股骨頭壞死的動物實驗研究[D];鄭州大學(xué);2010年

2 馬云輝;股骨頭壞死骨代謝異常機(jī)制的研究[D];中南大學(xué);2011年

3 顧文飛;SARS后骨壞死非手術(shù)治療患者7年隨訪研究[D];中國中醫(yī)科學(xué)院;2011年

4 毛強(qiáng);激素性股骨頭壞死基因表達(dá)變化及右歸飲調(diào)控作用的實驗研究[D];浙江中醫(yī)藥大學(xué);2011年

5 李衛(wèi)華;六味地黃丸預(yù)防激素性股骨頭壞死的分子機(jī)制研究[D];河南大學(xué);2010年

6 陳強(qiáng);四種中藥對大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向軟骨細(xì)胞分化后增殖影響的實驗研究[D];南京中醫(yī)藥大學(xué);2012年

7 張占勇;葛根提取物對激素誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞Wnt/β-catenin信號通路的調(diào)節(jié)作用[D];福建中醫(yī)藥大學(xué);2013年

8 鄭偉強(qiáng);復(fù)方巴戟天合劑聯(lián)合尼莫地平治療早期激素性股骨頭壞死的實驗研究及臨床觀察[D];福建中醫(yī)藥大學(xué);2013年

9 趙英偉;繼發(fā)性膝關(guān)節(jié)骨壞死外科與保守治療效果對比[D];吉林大學(xué);2013年

10 卞敬琦;芪丹活骨膠囊藥學(xué)及藥效學(xué)實驗研究[D];黑龍江中醫(yī)藥大學(xué);2013年

【二級參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前8條

1 李雄,袁浩,何偉,方斌,貝美蓮;大劑量激素沖擊應(yīng)用與長期應(yīng)用對股骨頭壞死影響的動物實驗[J];骨與關(guān)節(jié)損傷雜志;1999年04期

2 俞索靜,肖魯偉,吳承亮;右歸飲對體外成骨細(xì)胞增殖和分化影響的實驗研究[J];浙江臨床醫(yī)學(xué);2004年12期

3 婁晉寧;微血管內(nèi)皮細(xì)胞的培養(yǎng)及其在醫(yī)學(xué)研究中的應(yīng)用[J];微循環(huán)學(xué)雜志;2004年03期

4 殷力,李月白,許建中,夏磊,翟福英,廖文勝,王義生,崔全軍;地塞米松調(diào)節(jié)骨髓基質(zhì)細(xì)胞成脂及成骨分化的研究[J];中華實驗外科雜志;2000年06期

5 梁光波,金惠銘;微血管內(nèi)皮細(xì)胞的分離和培養(yǎng)[J];中國微循環(huán);2002年01期

6 祝建中;趙基棟;苗宗寧;錢寒光;;體外誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化為血管內(nèi)皮細(xì)胞的實驗研究[J];中國微循環(huán);2005年06期

7 李儀奎;中藥血清藥理學(xué)實驗方法的若干問題[J];中藥新藥與臨床藥理;1999年02期

8 吉瑞瑞,李付英,張雪靜,段重高,周亞偉;淫羊藿苷對缺氧誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷的保護(hù)作用[J];中國中西醫(yī)結(jié)合雜志;2005年06期

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 田麗芳;郭永勝;李彥軍;;微血管內(nèi)皮細(xì)胞的功能概述[J];保定職業(yè)技術(shù)學(xué)院;2010年01期

2 田麗芳;郭永勝;李彥軍;胡格;;微血管內(nèi)皮細(xì)胞的功能概述[J];黑龍江畜牧獸醫(yī);2011年05期

3 陳志;朱剛;劉智;唐衛(wèi)華;王憲榮;馮華;;兔腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞的培養(yǎng)及鑒定[J];醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報;2006年10期

4 袁江姿;方煒;倪兆慧;戴慧莉;錢家麒;;人腹膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞的原代培養(yǎng)[J];上海交通大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2006年10期

5 張作明,郭鷂,杜紅俊,茍琳;不同腦部和腦區(qū)微血管內(nèi)皮細(xì)胞的培養(yǎng)[J];第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;1997年01期

6 梅志軍,陳思鋒;微血管內(nèi)皮細(xì)胞的分離方法[J];生理科學(xué)進(jìn)展;1998年03期

7 陳偉斌;李會;郭佩;樊玉梅;常彥忠;段相林;;小腸微血管內(nèi)皮細(xì)胞鐵轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)蛋白的發(fā)現(xiàn)[J];河北師范大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版);2008年06期

8 吳文斌,胡常林,湯為學(xué);大鼠腦皮質(zhì)微血管內(nèi)皮細(xì)胞的培養(yǎng)[J];重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2002年02期

9 陳莉芬;余震;陶陶;胡長林;;大腦皮質(zhì)微血管內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)及其缺氧性損害模型[J];西南師范大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版);2005年06期

10 胡金麟,常小飛,宋曉燕,李玉珍,宋欣;剪切力誘導(dǎo)微血管內(nèi)皮細(xì)胞K~+通道的開放[J];生物物理學(xué)報;2000年02期

相關(guān)會議論文 前10條

1 趙蓮;尤國興;廖福龍;陳龍;勞芳;韓東;周虹;;剪切粘度對微血管內(nèi)皮細(xì)胞血管舒縮因子表達(dá)、細(xì)胞粘彈性和能量耗散的影響[A];2008年全國生物流變學(xué)與生物力學(xué)學(xué)術(shù)會議論文摘要集[C];2008年

2 段重高;遲喧;李宏偉;修瑞娟;;大血管和微血管內(nèi)皮細(xì)胞功能個性特征的研究及其臨床應(yīng)用[A];面向21世紀(jì)的科技進(jìn)步與社會經(jīng)濟(jì)發(fā)展（下冊）[C];1999年

3 蔣雪峰;卞修武;肖華亮;王清良;;人膠質(zhì)瘤微血管內(nèi)皮細(xì)胞分離培養(yǎng)的改進(jìn)與鑒定[A];中華醫(yī)學(xué)會病理學(xué)分會2010年學(xué)術(shù)年會日程及論文匯編[C];2010年

4 李鑫;馬曉春;;血必凈注射液對腎臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞發(fā)揮保護(hù)作用的機(jī)制探討[A];中國重癥醫(yī)學(xué)的創(chuàng)新與發(fā)展——第二屆中國醫(yī)師協(xié)會重癥醫(yī)學(xué)醫(yī)師分會暨第九屆中國病理生理學(xué)會危重病醫(yī)學(xué)專業(yè)委員會2010年危重病醫(yī)學(xué)全國會議會刊[C];2010年

5 孫正達(dá);汪偉;沈蕾;邊偉;祝禾辰;;血必凈對小鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞株增殖的作用[A];2008全國中西醫(yī)結(jié)合危重病、急救醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議學(xué)術(shù)論文集[C];2008年

6 李鑫;馬曉春;;血必凈注射液對脂多糖誘導(dǎo)大鼠腎臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞組織因子表達(dá)的影響及機(jī)制探討[A];第三屆重癥醫(yī)學(xué)大會論文匯編[C];2009年

7 王關(guān)嵩;蔡文琴;錢桂生;;脂多糖對微血管內(nèi)皮細(xì)胞TKR活性影響的研究[A];解剖學(xué)雜志——中國解剖學(xué)會2002年年會文摘匯編[C];2002年

8 金惠銘;;TNFα引起微血管內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙的細(xì)胞分子機(jī)制[A];面向21世紀(jì)的科技進(jìn)步與社會經(jīng)濟(jì)發(fā)展（下冊）[C];1999年

9 盧佳友;蔣雪峰;馮華;卞修武;高伯元;朱剛;林江凱;崔高宇;王憲榮;;人腦膠質(zhì)瘤微血管內(nèi)皮細(xì)胞的分離培養(yǎng)及體外生物學(xué)特性觀察[A];中國醫(yī)師協(xié)會神經(jīng)外科醫(yī)師分會首屆全國代表大會論文匯編[C];2005年

10 趙煒;王雨生;朱潔;張鵬;惠延年;馬吉獻(xiàn);;缺氧條件下基因緘默視網(wǎng)膜上皮細(xì)胞缺氧誘導(dǎo)因子后對牛脈絡(luò)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞細(xì)胞增生、管腔形成的影響[A];中國眼底病論壇·全國眼底病專題學(xué)術(shù)研討會論文匯編[C];2008年

相關(guān)重要報紙文章 前2條

1 ;重視微循環(huán)研究 為臨床應(yīng)用服務(wù)[N];中國醫(yī)藥報;2003年

2 張玉勤;放療可引起胃腸綜合征[N];中國醫(yī)藥報;2002年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 張作明;腦不同部位微血管內(nèi)皮細(xì)胞異質(zhì)性的探討[D];第四軍醫(yī)大學(xué);1996年

2 張明;人眼脈絡(luò)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞的體外培養(yǎng)及內(nèi)皮抑素抑制其增殖的體外研究[D];四川大學(xué);2004年

3 楊雨潤;糖皮質(zhì)激素對股骨頭內(nèi)微血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷的機(jī)制探討[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2011年

4 劉式威;血性屏障與血神經(jīng)屏障微血管內(nèi)皮細(xì)胞特性比較研究[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2007年

5 盧玲;腦和冠狀微血管內(nèi)皮細(xì)胞基因與蛋白表達(dá)的差異及decorin在腦缺血再灌注損傷中的作用研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2006年

6 張振;胰高血糖素樣肽-1對晚期蛋白氧化產(chǎn)物誘導(dǎo)的胰島微血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷的保護(hù)作用及機(jī)制[D];南方醫(yī)科大學(xué);2014年

7 青雪梅;從“絡(luò)”論治缺血性腦損傷的微血管內(nèi)皮細(xì)胞調(diào)控機(jī)制研究[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2006年

8 盧巖;電針對局灶性腦缺血大鼠海馬微血管內(nèi)皮細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)功能的影響[D];山東中醫(yī)藥大學(xué);2009年

9 趙蓮;流體粘度對大鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞微區(qū)力學(xué)特性的影響[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2009年

10 龔蕾;高糖致胰島微血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的機(jī)制及年齡相關(guān)胰島β細(xì)胞再生的研究[D];山東大學(xué);2013年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 徐華;血管生成素-1對脂多糖誘導(dǎo)的小鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷的保護(hù)作用及機(jī)制研究[D];蘇州大學(xué);2012年

2 陳海波;血—腦屏障與血—神經(jīng)屏障微血管內(nèi)皮細(xì)胞的比較研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2007年

3 李相元;高血糖對大鼠腦缺血后微血管內(nèi)皮細(xì)胞葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白-1表達(dá)的影響[D];天津醫(yī)科大學(xué);2004年

4 楊明濤;Slit2蛋白在小鼠心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞的表達(dá)及對心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖遷移影響的實驗研究[D];川北醫(yī)學(xué)院;2012年

5 夏明星;王不留行抑制人微血管內(nèi)皮細(xì)胞有效部位的分離純化及其藥效評價[D];江南大學(xué);2008年

6 王哲;糖基化終末產(chǎn)物對大鼠腎臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷及丙丁酚的保護(hù)作用[D];中國醫(yī)科大學(xué);2008年

7 徐燕;Endoglin基因沉默對卵巢癌微血管內(nèi)皮細(xì)胞干擾效應(yīng)的研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2010年

8 代麗美;DM/PM肌肉微血管病變研究及機(jī)理探討[D];蘇州大學(xué);2009年

9 李鑫;血必凈注射液對脂多糖誘導(dǎo)大鼠腎臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞組織因子表達(dá)的影響及機(jī)制探討[D];中國醫(yī)科大學(xué);2010年

10 湛奕;放線菌素D/TNF-α誘導(dǎo)小鼠胰島微血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2009年

，

本文編號：2365396