【摘要】： 目的:分析廣西三地(龍州、南丹、德保)旋毛蟲分離株與河南旋毛蟲分離株之間的基因差異以及與Genbank中旋毛蟲種的基因差異,判斷各分離株之間的親緣關系;闡述旋毛蟲自然感染龍州果子貍宿主的部分生物學特征,為探討廣西旋毛蟲病爆發(fā)的原因提供科學依據(jù)。 方法:對廣西旋毛蟲3個分離株和河南旋毛蟲分離株基因組DNA進行提取,選取核糖體DNA(rDNA)的5S rDNA基因、線粒體DNA(mtDNA)的細胞色素氧化酶1(COX1)基因和線粒體DNA大亞基(mt-lsrDNA)基因作為分子標記,對目的基因進行PCR擴增,并采用雙向測序法或T-A克隆測序法對PCR產(chǎn)物進行測序。 應用Clustal X軟件對旋毛蟲基因序列進行排列比較,應用Dnastar軟件包比較序列的同源性。然后采用Kimura雙參數(shù)法計算遺傳距離,采用鄰接法(N-J法)、非加權組平均法(UPGMA)和最大簡約法(MP)分別構建系統(tǒng)發(fā)生樹,并且與Genbank已知的旋毛蟲相應基因序列進行對照比較。同時對龍州果子貍旋毛蟲分離株進行囊包形態(tài)學、毒力和保姆細胞形成時間進行實驗觀察。 結果:龍州旋毛蟲分離株、南丹旋毛蟲分離株及德保旋毛蟲分離株與基因庫中T.spiralis 5S rDNA的相似度為98.3%～99.1%,遺傳距離為0.014～0.028。龍州旋毛蟲分離株、南丹旋毛蟲分離株及河南分離株與基因庫中T.spiralis COX1基因的相似度為98.8%～99.0%,遺傳距離為0.003～0.005。龍州旋毛蟲分離株、河南分離株與基因庫中T.spiralis的mt-lsrDNA相似度分別為99.8%和99.5%,二者與基因庫中T.spiralis的遺傳距離則分別為0.003和0.005。 四株分離株之間的相似度及遺傳距離進行比較,龍州旋毛蟲分離株、南丹旋毛蟲分離株、德保旋毛蟲分離株5S rDNA的相似度為97.6%～98.8%,遺傳距離為0.014～0.028。龍州旋毛蟲分離株和南丹旋毛蟲分離株、河南分
[Abstract]:Objective: to analyze the genetic differences between Trichinella spiralis isolates and Henan Trichinella isolates in three regions of Guangxi (Longzhou, Nandan, Debao), and to determine the genetic relationship between Trichinella spiralis and Trichinella spiralis species in Genbank. This paper describes some biological characteristics of Trichinella spiralis naturally infecting the host of civets in Longzhou, and provides scientific basis for exploring the causes of outbreak of trichinellosis in Guangxi. Methods: genomic DNA was extracted from three isolates of Trichinella spiralis from Guangxi and Henan Province. The 5s rDNA gene of ribosomal DNA (rDNA) was selected. Cytochrome oxidase 1 (COX1) gene and mitochondrial DNA large subunit (mt-lsrDNA) gene of mitochondrial DNA (mtDNA) were used as molecular markers to amplify the target gene by PCR. The PCR products were sequenced by two-way sequencing or T-A clone sequencing. The sequence of Trichinella spiralis gene was compared by Clustal X software and the homology of the sequence was compared by Dnastar software package. Then the genetic distance is calculated by Kimura two-parameter method, and the phylogenetic tree is constructed by using the adjacency method (N-J method), the non-weighted group average method (UPGMA) and the maximum reduction method (MP), respectively. The results were compared with the corresponding gene sequences of Trichinella spiralis known by Genbank. At the same time, the cysts morphology, virulence and nanny cell formation time were observed. Results: the similarity between the isolates of Trichinella spiralis, Trichinella nandanensis and Trichinella pyrrolimus and T.spiralis 5s rDNA in gene bank was 98.3 and 99.1, and the genetic distance was 0.014 and 0.028. The similarity between the isolates of Trichinella spiralis, Trichinella Nandan and Henan isolates and T.spiralis COX1 gene in gene bank was 98.8 ~ 99.0 and the genetic distance was 0.003 ~ 0.005. The mt-lsrDNA similarity between the isolates of Trichinella spiralis in Longzhou and Henan Province was 99.8% and 99.55.The genetic distance between them and T.spiralis in gene bank was 0.003 and 0.005, respectively. The similarity and genetic distance among the four isolates were compared. The similarity of 5S rDNA and genetic distance of Trichinella spiralis, Trichinella nandanensis and Trichinella Dobo were 97.698. 8 and 0. 014 0. 028, respectively. Isolates of Trichinella spiralis and Trichinella Nandan in Longzhou, Henan Province
【學位授予單位】：廣西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2006
【分類號】：R383

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本文編號：2339291