【摘要】：【目的】建立雞脂肪源間充質干細胞的分離與鑒定方法.【方法】用I型膠原酶消化法分離天露黃雞脂肪間充質干細胞(AMSCs),CCK-8檢測細胞生長活力,RT-PCR鑒定其特異性標記物,化學法對其進行成脂和成骨分化誘導.【結果和結論】原代及傳代的細胞呈成纖維細胞樣形態(tài),并能傳代至10代,其活力無明顯變化;細胞生長曲線呈S型;RT-PCR檢測顯示AMSCs的特異性標志物CD71、CD44和CD29表達呈陽性,而屬于造血干細胞的特異性標志物CD34和CD45呈陰性;AMSCs通過不同誘導液被成功誘導分化為成骨細胞和脂肪細胞,在成脂分化過程中有脂滴形成,油紅O染色呈陽性,過氧化物酶體增殖物激活受體基因γ(PPARγ)和脂肪酸基因(FAS)的mRNA表達量升高;在成骨分化過程中有鈣結節(jié)形成,茜素紅染色呈陽性,堿性磷酸酶(ALP)活性檢測對照組與誘導組比較差異顯著(P㩳0.05),ALP基因和骨形態(tài)發(fā)生蛋白基因(BMP2)的mRNA表達量升高.研究表明,雞AMSCs具有分化為多種細胞的潛能.
[Abstract]:[objective] to establish a method for isolation and identification of adipose derived mesenchymal stem cells from chicken. [methods] the (AMSCs), CCK-8 of adipose mesenchymal stem cells from Tianlu Yellow Chicken was isolated by type I collagenase digestion. RT-PCR identified its specific marker and induced its adipogenic and osteogenic differentiation by chemical method. [results and conclusion] the primary and passaged cells were fibroblast-like and could be subcultured to the 10th generation, but their activity did not change significantly. The expression of CD71,CD44 and CD29 in AMSCs was positive, but CD34 and CD45 in hematopoietic stem cells were negative. AMSCs was successfully induced to differentiate into osteoblasts and adipocytes through different induction fluids. Lipid droplets were formed in the process of adipogenic differentiation, and oil red O staining was positive. The mRNA expression of peroxisome proliferator-activated receptor gene 緯 (PPAR 緯) and fatty acid gene (FAS) was increased. Calcium nodules were formed during osteogenic differentiation and alizarin red staining was positive. The activity of alkaline phosphatase (ALP) in the control group was significantly different from that in the induced group (P0. 05). The mRNA expression of ALP gene and bone morphogenetic protein gene (BMP2) was increased. Studies have shown that chicken AMSCs has the potential to differentiate into a variety of cells.
【作者單位】： 華南農業(yè)大學獸醫(yī)學院;
【基金】：國家自然科學基金(31272519)
【分類號】：R329

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本文編號：2334169