發(fā)布時間：2018-11-15 06:57

【摘要】： 背景隨著外科技術(shù)的發(fā)展和強有效的免疫抑制劑的臨床應(yīng)用,肝臟移植已經(jīng)成為治療慢性終末期肝病、急性肝功能衰竭等疾病的主要治療方式。臨床肝臟移植技術(shù)的發(fā)展有賴于大量動物實驗研究,實驗大鼠由于其價格低廉、遺傳背景清晰、飼養(yǎng)管理的簡捷可控性使其成為眾多實驗動物的首選。大鼠肝臟移植模型是研究肝臟移植器官保存、缺血—再灌注損傷、血流動力學(xué)、免疫抑制劑、移植排斥反應(yīng)及免疫耐受等方面的理想動物模型。自1973年Lee[1、2]首次建立大鼠肝臟移植模型,經(jīng)過30多年眾多中外學(xué)者的改進,現(xiàn)在改良的Kamada“二袖套法”已成為廣泛采用的經(jīng)典術(shù)式。在大鼠的品系選擇方面,國外大多選用近交系大鼠,如:Lewis—BN、DA—Lewis、PVG—Lewis等,國內(nèi)由于鼠種、價格等諸多因素,廣泛選用封閉群SD與近交系Wistar大鼠進行移植。 目的建立大鼠原位肝臟移植急性排斥模型,驗證以Lewis大鼠為供體、BN大鼠為受體的組合的排斥強度,為肝臟移植排斥反應(yīng)或免疫耐受的實驗研究提供模型及實驗依據(jù)。 方法⑴.按照改良Kamada法建立近交系大鼠Lewis—BN的肝臟移植模型;⑵.將術(shù)后大鼠隨機分成兩組:實驗組( n=15) ,術(shù)后未進行特殊的干預(yù);對照組( n=15) ,術(shù)后1～7天用FK506 0. 2mg/( kg·d)灌胃。術(shù)后4、7和10天各組隨機處死3只,收集血清標本與肝臟標本,其余血清標本經(jīng)尾靜脈取血獲得;⑶.觀察各組剩余6只BN大鼠的生存情況;⑷.將各組的肝臟組織標本HE染色后在光鏡下觀察病理改變;⑸.將各組所采集的血清樣本行肝功能檢測; (6).ELISA法檢測血清γ-干擾素(IFN-γ)、白介素-10(IL-10)的含量;⑺免疫組化SP法檢測肝臟組織內(nèi)IFN-γ、IL-10的表達;⑻.TUNEL法檢測肝細胞凋亡; 結(jié)果⑴經(jīng)過對實驗準備期100例大鼠肝臟移植手術(shù)的熟悉和相互配合,我們施行了共32例Lewis—BN大鼠的肝臟移植手術(shù),手術(shù)成功率為93.8%(30/32);⑵術(shù)后實驗組BN大鼠在7天以后相繼死亡,中位生存期為9天,相應(yīng)的出現(xiàn)了肝功能的惡化:轉(zhuǎn)氨酶、膽紅素的升高、白蛋白的下降,移植肝病理提示中-重度的免疫排斥;而FK506處理后的BN大鼠術(shù)后中位生存期為51天,較BN大鼠明顯延長(P0.05),肝功能亦好于實驗組大鼠,病理提示不明顯或輕度排斥反應(yīng);⑶術(shù)后第7、10天,實驗組BN大鼠血清IFN-γ的含量明顯高于術(shù)前和對照組(P0.05),移植肝內(nèi)亦呈陽性表達,而對照組出現(xiàn)了IL-10的高表達,顯著高于術(shù)前和實驗組(P0.05)。⑷實驗組肝細胞凋亡較FK506干預(yù)組顯著。 結(jié)論⑴以近交系Lewis大鼠為供體、BN大鼠為受體的組合發(fā)生的急性排斥反應(yīng)強烈而又穩(wěn)定,是理想的大鼠肝臟移植急性排斥模型;⑵熟練的手術(shù)操作、精細的顯微外科技術(shù)、有效的麻醉以及良好的圍手術(shù)期管理是成功建立大鼠肝臟移植模型的關(guān)鍵;⑶血清IFN-γ、IL-10的不同水平表達有助于大鼠肝移植后發(fā)生急性排斥的診斷。
[Abstract]:Background with the development of surgical techniques and the clinical application of powerful immunosuppressants, liver transplantation has become the main treatment for chronic end-stage liver disease, acute liver failure and other diseases. The development of clinical liver transplantation technology depends on a large number of animal experiments. Experimental rats are the first choice for many experimental animals because of their low price, clear genetic background, simple and controllable feeding and management. Rat liver transplantation model is an ideal animal model to study organ preservation, ischemia-reperfusion injury, hemodynamics, immunosuppressant, graft rejection and immune tolerance. The rat liver transplantation model was established for the first time by Lee in 1973. After more than 30 years' improvement, the modified Kamada "two-cuff method" has become a classical procedure widely used. In the selection of rat strains, inbred rats are mostly used in foreign countries, such as Lewis-BN,DA-Lewis,PVG-Lewis and so on. Because of many factors, such as rat species, price and so on, closed group SD and inbred Wistar rats are widely used for transplantation in China. Objective to establish an acute rejection model of orthotopic liver transplantation (OLT) in rats, and to verify the rejection intensity of the combination of Lewis rats as donors and BN rats as recipients, and to provide a model and experimental basis for the experimental study of liver transplantation rejection or immune tolerance. Method 1. Liver transplantation model of inbred rat Lewis-BN was established by modified Kamada method. 2. The rats were randomly divided into two groups: experimental group (n = 15) without special intervention and control group (n = 15) with FK506 0. 2mg/ (kg d). On the 7th and 10th day after operation, 3 rats were randomly killed in each group. The serum and liver samples were collected, and the other serum samples were collected from caudal vein. The survival status of the remaining 6 BN rats in each group was observed. The pathological changes were observed by HE staining under light microscope. The serum samples of each group were tested for liver function. (6) the levels of serum interferon 緯 (IFN- 緯) and interleukin-10 (IL-10) were detected by). ELISA method. (7) the expression of IFN- 緯 and IL-10 in liver tissue was detected by immunohistochemical SP method, and apoptosis of hepatocytes was detected by 8.TUNEL method. Results (1) after being familiar with and cooperating with each other in 100 cases of liver transplantation, we performed liver transplantation in 32 cases of Lewis-BN rats. The success rate of the operation was 93.8% (30 / 32). 2After 7 days, BN rats in the experimental group died successively, and the median survival time was 9 days. The corresponding deterioration of liver function appeared: the elevation of transaminase, bilirubin, the decrease of albumin, and the pathological indication of moderate to severe immunological rejection in the transplanted liver. The median survival time of BN rats treated with FK506 was 51 days, which was significantly longer than that of BN rats (P0.05). The liver function of BN rats was better than that of experimental rats. 3 on the 7th day after operation, the levels of IFN- 緯 in serum of BN rats in the experimental group were significantly higher than those in the preoperative and control groups (P0.05), and the expression of IL-10 was also positive in the transplanted liver, while the high expression of IL-10 was found in the control group. 4 the hepatocyte apoptosis in experimental group was significantly higher than that in FK506 intervention group (P0.05). Conclusion 1Acute rejection induced by the combination of inbred Lewis rats and BN rats is strong and stable. It is an ideal model for acute rejection of liver transplantation in rats. 2 skilled operation, fine microsurgical techniques, effective anesthesia and good perioperative management are the key to the successful establishment of rat liver transplantation model; 3 the expressions of IFN- 緯 and IL-10 in serum were helpful for the diagnosis of acute rejection after liver transplantation in rats.
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號】：R657.3;R-332

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本文編號：2332478