【摘要】： 接觸抑制現(xiàn)象具有重要的生理意義,其與機(jī)體內(nèi)器官、組織的形態(tài)、大小以及各類細(xì)胞數(shù)量的控制有著密切的關(guān)系。機(jī)體的組織器官生長到一定程度后會自然停止生長,而不是無限制的長大;在體外培養(yǎng)過程中,當(dāng)細(xì)胞分裂增殖到一定程度,達(dá)到相互接觸時,細(xì)胞停止分裂。一般認(rèn)為,接觸抑制是由于細(xì)胞數(shù)量的增加消耗了局部區(qū)域的促分裂因子;另一方面是細(xì)胞接觸時自身分泌了一些細(xì)胞增殖的抑制因子。但Nakatsuji Y和HM.Robert的研究表明:星形膠質(zhì)細(xì)胞的接觸抑制不是由可溶性因子所引起,而是由星形膠質(zhì)細(xì)胞間的相互接觸誘發(fā)了增殖抑制機(jī)制所引起的。目前接觸抑制的機(jī)制不甚清楚。為了研究接觸抑制的原理,我們以星形膠質(zhì)細(xì)胞做為模型細(xì)胞,研究了接觸抑制的可能機(jī)制,并探討了CD81在其中的可能作用。 本研究共分三部分。第一部分為了觀察引起星形膠質(zhì)細(xì)胞接觸抑制的作用究竟是由于細(xì)胞自身分泌了一些細(xì)胞增殖的抑制因子,還是由于細(xì)胞相互接觸而引起的,本研究將純化的星形膠質(zhì)細(xì)胞分三組,在細(xì)胞處于低匯合,半?yún)R合,完全匯合時加入接觸抑制條件培養(yǎng)基,繼續(xù)培養(yǎng)20h后,以MTT法檢測細(xì)胞數(shù)、以流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期時相細(xì)胞指數(shù)并進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。條件培養(yǎng)基沒有抑制星形膠質(zhì)細(xì)胞的增殖,對其細(xì)胞周期也無明顯影響。結(jié)果顯示星形膠質(zhì)細(xì)胞的接觸抑制不是由于星形膠質(zhì)細(xì)胞接觸時釋放的可溶性因子引起的,而是由星形膠質(zhì)細(xì)胞間的相互接觸誘發(fā)了增殖抑制機(jī)制所引起的。并進(jìn)一步觀察將處于接觸抑制的星形膠質(zhì)細(xì)胞分離去接觸化,觀察細(xì)胞是否再次進(jìn)入增殖狀態(tài),以及匯合后是否又進(jìn)入抑制狀態(tài)。我們將處于接觸抑制的星形膠質(zhì)細(xì)胞分離,再培養(yǎng),當(dāng)細(xì)胞將至低匯合、半?yún)R合和全匯合時加入BrdU,繼續(xù)培養(yǎng)6h后收集細(xì)胞,與結(jié)合有FITC的抗BrdU抗體共孵育,然后通過流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期和細(xì)胞的BrdU陽性率。結(jié)果顯示:處于接觸抑制的星形膠質(zhì)細(xì)胞分離、再培養(yǎng),細(xì)胞處于低匯合和半?yún)R合狀態(tài)時,細(xì)胞增殖率再次增高。當(dāng)細(xì)胞全匯合處于接觸狀態(tài)時,細(xì)胞增殖率明顯下降。表明:處于接觸抑制的星形膠質(zhì)細(xì)胞分離去接觸后,細(xì)胞又恢復(fù)了增殖能力。而再次相互接觸時,細(xì)胞增殖又受到抑制。 CD81分子,即抗增生抗體識別的靶抗原(Target of the Antiproliferative Antibody-1, TAPA-1),它是一種分子量為26KD的非糖基化膜蛋白,屬干四跨膜區(qū)蛋白( tetraspanin )超家族成員,含有4個跨膜轉(zhuǎn)膜區(qū)和2個胞外區(qū),廣泛分布在各種組織和細(xì)胞的表面,可影響細(xì)胞的粘附、激活、增殖和分化,有改變細(xì)胞形態(tài)、抑制合胞體形成等生物學(xué)功能。Sullivan等人研究發(fā)現(xiàn)未成熟的星形膠質(zhì)細(xì)胞不表達(dá)或低表達(dá)CD81,隨著星形膠質(zhì)細(xì)胞的逐漸成熟,CD81的表達(dá)也逐漸增強(qiáng),逐步達(dá)到成年水平。CD81對細(xì)胞的增殖具有調(diào)節(jié)的作用,并且在不同的細(xì)胞發(fā)揮的作用不同。 因此第二部分研究了抗CD81抗體對處于不同狀態(tài)的純化培養(yǎng)的星形膠質(zhì)細(xì)胞增殖抑制的影響。將純化的星形膠質(zhì)細(xì)胞分三組,在細(xì)胞處于低匯合,半?yún)R合,完全匯合時加入抗CD81抗體(4μg/ml),繼續(xù)培養(yǎng)18小時后收集細(xì)胞,以MTT比色法和流式細(xì)胞術(shù)觀察抗CD81抗體對處于不同狀態(tài)星形膠質(zhì)細(xì)胞的影響并進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。結(jié)果表明與對照組相比,抗CD81抗體對處于低匯合,半?yún)R合的星形膠質(zhì)細(xì)胞有明顯抑制作用,其抑制率分別為15.56%和34.44%,對處于完全匯合狀態(tài)的星形膠質(zhì)細(xì)胞有輕微抑制作用,其抑制率為9.62%。因此抗CD81抗體對處于低匯合和半?yún)R合的星形膠質(zhì)細(xì)胞均有顯著抑制作用,對已經(jīng)處于接觸抑制的星形膠質(zhì)細(xì)胞只有輕微抑制作用。 為了進(jìn)一步研究抗CD81抗體對星形膠質(zhì)細(xì)胞抑制作用的時效關(guān)系,第三部分研究了抗CD81抗體作用不同時間后對星形膠質(zhì)細(xì)胞增殖抑制的作用。將純化的星形膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)12小時后,加入抗CD81抗體(4μg/ml),分別作用18小時,32小時及96小時后,以MTT比色法檢測星形膠質(zhì)細(xì)胞的細(xì)胞活性,計算抑制率;以流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期時相。MTT法檢測結(jié)果表明與對照組相比,抗CD81抗體作用18小時,32小時及96小時后均對星形膠質(zhì)細(xì)胞有顯著抑制作用,其抑制率分別為11.17%,13.17%,27.49%。流式檢測結(jié)果表明抗CD81抗體作用18小時后,S期細(xì)胞指數(shù)與對照組相比,增加了16.09,星形膠質(zhì)細(xì)胞主要被阻滯于S期;作用32小時后, G0/G1期細(xì)胞指數(shù)與對照組相比增加了3.08; 96小時后,細(xì)胞指數(shù)與對照組相比增加了5.87,細(xì)胞主要滯留于G0/G1期,即抗CD81抗體作用不同時間后均對星形膠質(zhì)細(xì)胞有顯著抑制作用,抑制作用隨時間增加而增強(qiáng)。早期抗CD81抗體使星形膠質(zhì)細(xì)胞阻滯于S期,隨著作用時間的延長,逐漸使細(xì)胞阻滯于G0/G1期。 結(jié)論:星形膠質(zhì)細(xì)胞的接觸抑制不是由可溶性因子所引起,而是由星形膠質(zhì)細(xì)胞間的相互接觸誘發(fā)了增殖抑制機(jī)制所引起的。處于接觸抑制的星形膠質(zhì)細(xì)胞分離去接觸后,細(xì)胞又恢復(fù)了增殖能力。而再次相互接觸時,細(xì)胞增殖又受到抑制。抗CD81抗體對處于低匯合和半?yún)R合的星形膠質(zhì)細(xì)胞均有顯著抑制作用,對已經(jīng)處于接觸抑制的星形膠質(zhì)細(xì)胞只有輕微抑制作用。抗CD81抗體作用不同時間后均對星形膠質(zhì)細(xì)胞有顯著抑制作用,抑制作用隨時間增加而增強(qiáng)。早期抗CD81抗體使星形膠質(zhì)細(xì)胞阻滯于S期,隨著作用時間的延長,逐漸使細(xì)胞阻滯于G0/G1期。CD81在星形膠質(zhì)細(xì)胞接觸抑制中起到了一定作用,其機(jī)制可能是抗CD81抗體與膜上的CD81結(jié)合,啟動了星形膠質(zhì)細(xì)胞增殖抑制機(jī)制。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號】：R392

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 彭會明;劉仁剛;羅賢雯;周潔萍;;抗CD81抗體對星形膠質(zhì)細(xì)胞增殖的抑制作用[J];解剖學(xué)報;2007年01期

，

本文編號：2327161