發(fā)布時間：2018-11-11 08:07

【摘要】： 目的觀察弓形蟲排泄分泌抗原(excreted/secreted antigens, ESA)與可溶性速殖子抗原(soluble tachyzoite antigen, STAg)聯(lián)合滴鼻免疫小鼠誘導的黏膜及系統(tǒng)免疫應答的能力,探討其誘導免疫應答的機制,為弓形蟲黏膜疫苗復合抗原的篩選提供初步的理論和實驗依據(jù)。 方法本實驗分三部分:第一部分觀察弓形蟲感染小鼠不同時間從腹水中獲取的ESA滴鼻免疫小鼠誘導黏膜和系統(tǒng)免疫應答的效果,確定獲取ESA的適宜時間。分別用弓形蟲感染第0h、6h、12h、24h、36h、48h和60h無菌收集的腹腔液中獲取的ESA以20μg/只或PBS以20μl/只滴鼻免疫10只小鼠2次,間隔14天。觀察小鼠狀況并記錄體重,末次免疫后第14天頸椎脫臼處死小鼠,ELISA法檢測血清弓形蟲特異性IgG、小腸沖洗液sIgA抗體水平,分離脾淋巴細胞、腸上皮內(nèi)淋巴細胞(intestinal intraepithelial lymphocytes, iIEL)及腸系膜淋巴結(jié)淋巴細胞(mesenteric lymph node lymphocytes,MLNL)并計數(shù)。 第二部分觀察以不同劑量弓形蟲感染小鼠48h獲取的ESA滴鼻免疫小鼠誘導黏膜及系統(tǒng)免疫應答的效果,確定合適的ESA鼻內(nèi)接種劑量。分別用5μg、10μg、20μg和30μg ESA/只或PBS 20μl/只滴鼻免疫8只小鼠2次,間隔14天。觀察小鼠狀況,于末次免疫后第14天頸椎脫臼處死小鼠,ELISA法檢測鼻咽沖洗液弓形蟲特異性sIgA、小腸沖洗液sIgA、血清IgG抗體水平,分離iIEL和MLNL及脾淋巴細胞并計數(shù)。 第三部分觀察弓形蟲排泄分泌抗原與可溶性速殖子抗原聯(lián)合或單獨滴鼻免疫小鼠誘導黏膜及系統(tǒng)免疫應答的效果,篩選弓形蟲復合黏膜疫苗候選抗原成分。分別用30μg ESA、20μg STAg、25μg聯(lián)合抗原(15μg ESA加10μgSTAg)/只或PBS 20μl/只滴鼻免疫10只小鼠2次,間隔14天。觀察小鼠健康狀況并記錄體重,于末次免疫后第14天頸椎脫臼處死小鼠,ELISA法檢測小腸沖洗液弓形蟲特異性sIgA、血清IgG抗體水平,分離iIEL和脾淋巴細胞并計數(shù)。 結(jié)果不同時相ESA滴鼻免疫小鼠后,除60h組外,其它實驗組及PBS組小鼠健康狀況良好,體重變化隨時間均呈現(xiàn)上升趨勢。60h組小鼠狀態(tài)欠佳,體重增長較其它實驗組及PBS組緩慢(P0.05)。實驗組血清和黏膜特異性抗體水平升高,MLNL、iIEL和脾淋巴細胞發(fā)生增殖性應答。48h組和60組血清IgG、小腸沖洗液sIgA水平及iIEL、MLNL和脾淋巴細胞數(shù)量均明顯高于除36h組外的其他實驗組及PBS組(P0.01)。36h組小腸沖洗液sIgA水平及MLNL數(shù)量明顯高于0h組和PBS組(P0.05)。 不同劑量ESA滴鼻免疫小鼠后,各組小鼠健康狀況良好。隨鼻內(nèi)免疫ESA劑量的增加,實驗組特異性抗體水平不同程度的升高,MLNL、iIEL及脾淋巴細胞也發(fā)生不同程度
[Abstract]:Objective to observe the ability of excreted/secreted antigens, ESA) and (soluble tachyzoite antigen, STAg) to induce mucosal and systemic immune response in mice and to explore the mechanism of immune response induced by Toxoplasma gondii excretory secretory antigen (excreted/secreted antigens, ESA) and soluble tachyzoite antigen (soluble tachyzoite antigen, STAg). To provide a preliminary theoretical and experimental basis for screening complex antigen of Toxoplasma mucosal vaccine. Methods the experiment was divided into three parts: the first part was to observe the induction of mucosal and systemic immune response in mice inoculated with ESA from ascites at different times, and to determine the appropriate time for obtaining ESA in mice infected with Toxoplasma gondii (Toxoplasma gondii). 10 mice were immunized twice with Toxoplasma gondii (Toxoplasma gondii) infection at 20 渭 g / mouse or PBS with 20 渭 l / a intranasal drip for 48 h and 60 h, respectively, after infection with Toxoplasma gondii (Toxoplasma gondii) for 12 hours and 24 hours for 36 hours and 60 hours, respectively, with an interval of 14 days. The mice were killed by cervical dislocations on the 14th day after the last immunization. ELISA assay was used to detect the level of sIgA antibody to Toxoplasma gondii specific IgG, small intestinal irrigation fluid, and to isolate spleen lymphocytes and intestinal intraepithelial lymphocytes (intestinal intraepithelial lymphocytes,). IIEL) and mesenteric lymph node lymphocyte (mesenteric lymph node lymphocytes,MLNL) were counted. The second part was to observe the induction of mucosal and systemic immune response of mice immunized with ESA nasal drip with different doses of Toxoplasma gondii for 48 h, and to determine the appropriate dose of intranasal ESA inoculation. 8 mice were immunized with 5 渭 g 10 渭 g ESA/ or 30 渭 g ESA/ or 20 渭 l / PBS for 14 days. The mice were killed on the 14th day after the last immunization. The serum IgG antibody levels of Toxoplasma gondii specific sIgA, small intestinal lavage fluid (sIgA,), iIEL and MLNL and splenic lymphocytes were detected by ELISA method. The third part was to observe the effect of Toxoplasma gondii excretory secretory antigen and soluble tachyzoite antigen on mucosal and systemic immune responses of mice immunized with Toxoplasma gondii excretory secretory antigen and soluble tachyzoite antigen alone. 10 mice were immunized twice with 30 渭 g ESA,20 渭 g STAg,25 渭 g combined antigen (15 渭 g ESA plus 10 渭 gSTAg) or PBS 20 渭 l / mouse for 14 days. The mice were killed on the 14th day after the last immunization. The serum IgG antibody level of Toxoplasma gondii specific sIgA, was detected by ELISA method, and the iIEL and spleen lymphocytes were separated and counted. Results after nasal immunization with ESA at different time stages, the mice in the other experimental and PBS groups were in good health condition except for 60 h group, and the body weight change showed an increasing trend with time, and the mice in 60 h group were not in good condition. Weight gain was slower than other experimental groups and PBS group (P0.05). The levels of serum and mucosal specific antibodies increased, and MLNL,iIEL and splenic lymphocytes developed proliferative response in experimental group. 48 h group and 60 group of serum IgG, small bowel lavage fluid sIgA level and iIEL, The number of MLNL and splenic lymphocytes were significantly higher than those of other experimental groups and PBS groups except 36h group (P0.01). The sIgA level and MLNL number of small intestinal lavage fluid in 36h group were significantly higher than those in 0h group and PBS group (P0.05). After nasal immunization with different doses of ESA, the mice in each group were in good health. With the increase of the dose of intranasal immunized ESA, the level of specific antibody in the experimental group increased in different degrees, and MLNL,iIEL and splenic lymphocytes also occurred in different degrees.
【學位授予單位】：山西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2006
【分類號】：R392

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 周荃;;560例孕產(chǎn)婦TORCH監(jiān)測結(jié)果分析[J];中國現(xiàn)代藥物應用;2011年12期

2 王紅;李飛;曾瑾;李翠英;賈雪梅;;弓形蟲強毒株和弱毒株致密顆粒蛋白1基因的比較研究[J];中國病原生物學雜志;2011年08期

3 胡春穎;;婦女TORCH感染臨床分析[J];臨床合理用藥雜志;2011年26期

4 謝榮華;;匹多莫德增強弓形蟲GRA1蛋白免疫效果的動物實驗評價[J];中國免疫學雜志;2011年08期

5 鄧金榮;;當心時尚引來寄生蟲病[J];食品與健康;2002年11期

6 焦玉萌;章黎;葛以躍;梁越進;王勇;;弓形蟲排泄分泌抗原對B16F10黑素瘤小鼠CD4~+CD25~+Foxp3~+T細胞和NK細胞的影響[J];中國血吸蟲病防治雜志;2011年03期

7 張玲;周先軍;;TORCH感染與優(yōu)生優(yōu)育探討[J];內(nèi)蒙古中醫(yī)藥;2010年19期

8 柴秋文;劉瑞娟;;先天性病原體感染對兒童發(fā)育的影響[J];醫(yī)學研究與教育;2011年03期

9 江婷;劉成程;陳冬梅;;TORCH感染的血清學篩查[J];沈陽醫(yī)學院學報;2011年03期

10 陶鵬飛;雷素云;楊欣平;黃石珍;聶皎;;以中樞神經(jīng)系統(tǒng)癥狀為首發(fā)表現(xiàn)的艾滋病臨床分析[J];醫(yī)學綜述;2011年16期

相關(guān)會議論文 前10條

1 殷國榮;周永安;劉娟娟;孟曉麗;劉紅麗;;弓形蟲排泄-分泌抗原鼻內(nèi)免疫小鼠誘導體液免疫應答動態(tài)觀察[A];中華醫(yī)學會熱帶病與寄生蟲學分會機會性感染學術(shù)研討會論文匯編[C];2007年

2 鞏薇;衛(wèi)禮;王吉;賀爭鳴;邢瑞昌;;實驗小鼠弓形蟲檢測方法的建立及應用[A];中國實驗動物學會第六屆學術(shù)年會論文集[C];2004年

3 王凱慧;趙世英;徐之杰;;肺結(jié)核病人血清中弓形蟲CAg、IgG、IgM的檢測[A];中國動物學會第六屆全國青年寄生蟲學工作者學術(shù)討論會論文摘要集[C];2000年

4 鄒俊;黃驍舾;殷光文;劉賢勇;索勛;;弓形蟲活疫苗載體誘導宿主產(chǎn)生免疫應答的初步研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學會家畜寄生蟲學分會第六次代表大會暨第十一次學術(shù)研討會論文集[C];2011年

5 鐘秀會;宮新城;史萬玉;劉占民;翟向和;張鐵;李紹華;;弓形蟲急性感染與小鼠妊娠失敗相關(guān)性研究[A];人畜共患傳染病防治研究新成果匯編[C];2004年

6 雷明軍;戴五星;吳少庭;;弓形蟲膜表面抗原2(SAG2)基因工程疫苗的研究[A];湖北省暨武漢生物化學與分子生物學學會第八屆會員代表大會和第十五次學術(shù)年會論文摘要匯編[C];2004年

7 李雪蓮;郝永新;劉群;丁雋;張維;;弓形蟲轉(zhuǎn)染載體構(gòu)建及鼠IL-2基因轉(zhuǎn)染的初步研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學會家畜寄生蟲學分會第六次代表大會暨第十次學術(shù)研討會論文集[C];2009年

8 言慧;陳曉光;李華;周曉紅;吳昆;;弓形蟲SAG1基因截短片段的克隆、可溶性表達及活性鑒定[A];中國動物學會原生動物學分會第十二次學術(shù)討論會論文摘要匯編[C];2003年

9 宋韶鳴;賁曉明;施圣云;徐英美;吳玲;平鸚;劉海櫻;趙幽燕;;住院新生兒弓形蟲與巨細胞病毒感染發(fā)生率調(diào)查[A];新世紀全國首屆小兒綜合研究學術(shù)會議論文匯編[C];2001年

10 馬雅玲;諶劍飛;沈晶;楊六英;;腦卒中患者弓形蟲檢測的臨床意義[A];第四次全國中西醫(yī)結(jié)合神經(jīng)系統(tǒng)疾病學術(shù)研討會論文集[C];2002年

相關(guān)重要報紙文章 前10條

1 李新生;弓形蟲防治難題被攻克[N];農(nóng)民日報;2003年

2 荊晶;弓形蟲影響性格 讓人更愛貓[N];大眾科技報;2010年

3 林甘;豬場要注意弓形蟲的傳染[N];山東科技報;2001年

4 王有國;胎兒是我的人參果[N];家庭醫(yī)生報;2006年

5 北京友誼醫(yī)院北京熱帶醫(yī)學研究所研究員 甘紹伯 副主任醫(yī)師 馮曼玲;弓形蟲——寵物的“寵物”[N];健康報;2000年

6 林曉麗;養(yǎng)貓者易感染弓形蟲應謹防患精神分裂癥[N];中國中醫(yī)藥報;2007年

7 公衛(wèi)醫(yī)師 王彥增;飼養(yǎng)寵物小心染病(下)[N];醫(yī)藥養(yǎng)生保健報;2009年

8 熊湘非;謹防健康受損[N];大眾科技報;2001年

9 七十年代初人;孕婦應避免與寵物接觸[N];中國婦女報;2006年

10 江蘇省農(nóng)科院獸醫(yī)所 林繼煌;豬弓形蟲病[N];江蘇農(nóng)業(yè)科技報;2004年

相關(guān)博士學位論文 前10條

1 楊秋林;乳酸孔球菌表達口服弓形蟲基因疫苗的研究[D];蘇州大學;2001年

2 李文姝;弓形蟲P30乳酸球菌口服疫苗免疫效果研究及弓形蟲ROP2-P30基因工程復合抗原的構(gòu)建[D];蘇州大學;2004年

3 朱翔;弓形蟲GRA6和SAG1基因克隆及其表達產(chǎn)物的應用研究[D];蘇州大學;2003年

4 李華文;我國弓形蟲不同分離株、RH株及其突變體同源性和差異研究[D];中山大學;2004年

5 周曉紅;弓形蟲MAG和tSAG1在轉(zhuǎn)基因番茄中的表達研究[D];第一軍醫(yī)大學;2004年

6 竇永喜;豬IFN-γ及其受體的生物學功能研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學院;2008年

7 劉立恒;柔嫩艾美耳球蟲比較蛋白組及免疫蛋白組研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學;2009年

8 曹利利;犬新孢子蟲“警報素”介導的宿主Th1型免疫應答的研究[D];吉林大學;2010年

9 李艾華;飛秒激光激發(fā)稀土摻雜鈮酸鋰單晶的上轉(zhuǎn)換發(fā)光研究[D];哈爾濱工業(yè)大學;2010年

10 魏洪吉;腫瘤干細胞樣人胰腺癌細胞在癌侵襲、轉(zhuǎn)移中作用的實驗研究[D];華中科技大學;2011年

相關(guān)碩士學位論文 前10條

1 龔婭;弓形蟲P30三種表達形式重組質(zhì)粒的構(gòu)建及遺傳免疫效果的初步測試[D];第一軍醫(yī)大學;2000年

2 王維;弓形蟲14-3-3基因克隆、表達及鑒定[D];安徽醫(yī)科大學;2002年

3 蔡力汀;弓形蟲核酸疫苗pcDNA_3/GRA_1的研究[D];中南大學;2003年

4 陳義忠;ZS株弓形蟲P22基因片段的克隆和表達[D];福建醫(yī)科大學;2003年

5 姚永偉;弓形蟲重組抗原P22的制備及應用[D];南京醫(yī)科大學;2004年

6 羅文;熒光定量PCR技術(shù)在弓形蟲臨床診斷中的應用[D];江西醫(yī)學院;2001年

7 章黎;弓形蟲排泄—分泌抗原（ESA）對小鼠部分免疫細胞亞群的影響[D];南京醫(yī)科大學;2009年

8 毛雯倩;不同毒力株弓形蟲排泄—分泌抗原（ESA）對小鼠免疫細胞亞群的影響[D];南京醫(yī)科大學;2012年

9 王小波;豬肉弓形蟲檢驗方法的研究[D];揚州大學;2004年

10 劉娟娟;弓形蟲排泄—分泌抗原（ESA）鼻內(nèi)免疫小鼠誘導的免疫應答的觀察[D];山西醫(yī)科大學;2006年

，

本文編號：2324263