【摘要】： 目的： 探討白念珠菌雙形態(tài)性形成的相關(guān)影響因素，尋找控制菌絲形成的關(guān)鍵基因。 方法： 1、分離培養(yǎng)八株不同來源的白念珠菌(標準菌株和臨床標本分離菌株)，控制白念珠菌菌絲生長的影響因素，包括孢子濃度、培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)基成分和pH值，觀察菌絲的生長特點和形成率的變化。 2、分別采用-80℃研磨、液氮研磨、酸洗玻璃珠三種破壁方法破壁，用TRIzol試劑提取白念珠菌菌絲相和酵母相的總RNA，對提取的RNA進行定性定量及完整性分析。 3、通過設(shè)置內(nèi)參的半定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)的方法測定白念珠菌雙形態(tài)性的四個相關(guān)調(diào)控基因EFG1、HWP1、HYR1、HGC1的mRNA在菌絲相和酵母相中的表達差異。 4、將八株白念珠菌分別接種在顯色培養(yǎng)基和玉米吐溫培養(yǎng)基上，用NB-UVB臨床照射劑量(0.4-3.0J／cm~2)對其進行3次／天，共7天的照射，觀察菌絲和酵母的生長及形態(tài)變化。 結(jié)果： 1、菌絲具有聚集生長成絮狀物的特點。在pH=5.0時，菌絲上的孢子易脫落；在pH=9.0時，易形成較大分生孢子；中性pH值最有利于純菌絲的生長。孢子濃度5×10~6／ml，在含10％胎牛血清pH7.0的PRMI1640培養(yǎng)基中，38℃靜置培養(yǎng)4到8小時，菌絲的形成效果好。菌絲純度大于95％。 2、三種破壁方法提取白念珠菌酵母相RNA的濃度(x±s，ug／ul)分別為：-80℃研磨法(0.464±0.101，ug／ul)、酸洗玻璃珠法(0.911±0.413，ug／ul)、液氮研磨法(1.418±0.524，ug／ul)。而且后兩者RNA的完整性比前者好。 3、HWP1和HGC1基因在菌絲相有表達，而在酵母相無表達。EFG1和HYR1基因在菌絲相和酵母相的表達沒有明顯差異。 4、隨著UVB照射劑量的增加，菌絲形成逐漸減少，菌絲上生長的分生孢子逐漸增多。照射劑量超過1.5J／cm~2念珠菌的生長受到明顯抑制。 結(jié)論： 1、血清、中性pH值、適當溫度有利于菌絲生長。 2、液氮研磨破壁和酸洗玻璃珠振蕩破壁為較好的破壁提取白念珠菌RNA的方法，其中液氮研磨法最好。 3、NB-UVB照射劑量在0.4—3.0J／cm~2的時候，，可抑制菌絲生長。 4、HWP1和HGC1基因為菌絲特異表達基因。
[Abstract]:Objective: to investigate the related factors of bimorphic formation of Candida albicans and to find the key genes to control the formation of hyphae. Methods: 1. Eight strains of Candida albicans from different sources (standard strains and clinical isolates) were isolated and cultured to control the factors affecting the hyphal growth of Candida albicans, including spore concentration and culture temperature. The composition of culture medium and pH value, the growth characteristics and formation rate of hyphae were observed. 2. The wall was broken by -80 鈩

本文編號：2305795