【摘要】：目的:探討選擇性去除供鼠(C57BL/6~(H-2b))細胞即移植物中表達CD25+、CD69+活化抗原的同種異體反應T 細胞減輕異基因小鼠骨髓移植急性移植物抗宿主病(GVHD)的可能性。 方法:以C57BL/6~(H-2b)小鼠為供鼠, BALB/c~(H-2b)小鼠為受鼠,建立MHC 完全不相合的急性致死性GVHD 模型。通過流式細胞儀檢測初次單向混合淋巴細胞反應(受鼠BALB/c 脾單個核細胞為刺激細胞,供鼠C57BL/6 脾單個核細胞為反應細胞,)細胞CD25+、CD69+表達情況,應用磁性細胞分離系統(tǒng)去除分選法在表達高峰去除CD25+、CD69+同種異體反應T 細胞,獲得陰性細胞。通過MTT 法在不同時間點(第1、2、3、4、5 天)檢測再次混合淋巴細胞反應的細胞增殖情況(新鮮相同刺激原、無關(guān)刺激原、腫瘤刺激原加入陰性細胞進行再次單向混合淋巴細胞反應)。移植處理組為陰性細胞(2.0*106)與C57BL/6 骨髓細胞(5.0*106)共輸注給致死劑量照射的BALB/c小鼠;移植對照組為相同條件下初次單向混合淋巴細胞反應的細胞(2.0*106)與C57BL/6 骨髓細胞(5.0*106)共輸注,比較急性GVHD 的發(fā)生率、發(fā)生程度、造血重建及存活時間情況。 結(jié)果:將供鼠C57BL/6~(H-2b)脾單個核細胞(2.0*10~6)混合其骨髓細胞(5.0*10~6)通過尾靜脈輸注給致死劑量照射的受鼠BALB/cH-2d小鼠可以成功地構(gòu)建急性GVHD 模型,100%發(fā)生GVHD,病理組織表現(xiàn)重度急性GVHD 病理改變。初次混合淋巴細胞反應提示CD69+、CD25+的表達率高峰分別為第48 小時、72 小時(峰值分別為21.5±1.1%,56.4±3.4%),結(jié)合其余時間點實驗數(shù)據(jù)提示初次混合淋巴細胞反應的第48 小時為選擇性去除CD25+、CD69+的最好時機。再次單向混合淋巴細胞反應顯示明顯降低了對相同刺激原的反應性(29.02%～64.17%, 48.82%±13.71%),保留大部分對無關(guān)刺激原的反應性(49.61%～75.69%,65.47%±9.84%)和腫瘤刺激原的反應性(61.14～68.62%,64.83%±3.65%)。在構(gòu)建的急性GVHD 模型(C57BL/6 →BALB/c)中,處理組急性GVHD 發(fā)生率下降(10 只中3 只死于急性GVHD),病理形態(tài)學分析提示未發(fā)生或發(fā)生輕度急性GVHD;而對照組均在24 天內(nèi)死于急性GVHD,病理形態(tài)學分析提示為中重度急性GVHD。
[Abstract]:Aim: to investigate the possibility of selective removal of allogeneic T cells expressing CD25 and CD69 activated antigen in donor rat (C57BL / 6H-2b) cells to alleviate acute graft-versus-host disease (GVHD) after allogeneic bone marrow transplantation. Methods: C57BL / 6H-2b mice were used as donor mice and BALB/c~ (H-2b) mice as recipient mice to establish acute lethal GVHD model which was completely incompatible with MHC. Flow cytometry was used to detect the expression of CD25 and CD69 in primary unidirectional mixed lymphocyte reaction (splenic mononuclear cells of recipient rat BALB/c and donor spleen mononuclear cells of C57BL/6). The CD25 and CD69 allogeneic T cells were removed at the peak of expression by magnetic cell separation system and negative cells were obtained. The cell proliferation of remixed lymphocyte reaction was detected by MTT method at different time points (1 ~ 2 ~ 3 ~ 3 ~ 4 ~ 4 ~ 5 days) (fresh same stimulator, no stimulant). Tumor stimulator was added to negative cells for reunidirectional mixed lymphocyte reaction. In the transplantation treatment group, negative cells (2.0 ~ 106) and C57BL/6 bone marrow cells (5.0 ~ 106) were injected into BALB/c mice irradiated with lethal dose. In the control group, the primary unidirectional mixed lymphocyte reaction cells (2.0 ~ 106) and C57BL/6 bone marrow cells (5.0 ~ 106) were co-infused under the same conditions. The incidence and degree of acute GVHD were compared. Hematopoietic reconstitution and survival time. Results: the donor C57BL / 6 ~ (H-2b) splenic mononuclear cells (2.0 ~ 10 ~ (6) mixed with bone marrow cells (5.0 ~ 10 ~ (6) were successfully injected by tail vein to irradiated BALB/cH-2d mice with lethal dose. Build an acute GVHD model, The pathological changes of severe acute GVHD occurred in 100% of patients with GVHD,. The primary mixed lymphocyte reaction showed that the peak expression rates of CD69 and CD25 were at 48h and 72h (21.5 鹵1.1 and 56.4 鹵3.4%, respectively). Combined with the experimental data of other time points, 48 hours of primary mixed lymphocyte reaction was the best time to selectively remove CD25 and CD69. The reunidirectional mixed lymphocyte reaction showed that the reactivity to the same stimulant was significantly decreased (29.02 鹵64.17, 48.82% 鹵13.71%), and most of the reactivity to the unrelated stimulator was retained (49.61%, 75.69%). 65.47% 鹵9.84% and 61.14% 鹵9.84%, 64.83% 鹵3.65%, respectively. In the acute GVHD model (C57BL/6 BALB/c), the incidence of acute GVHD in the treatment group decreased (3 out of 10 died of acute GVHD), pathomorphology analysis showed no or mild acute GVHD;). In the control group, all died within 24 days of acute GVHD, pathomorphology analysis showed moderate and severe acute GVHD..
【學位授予單位】：蘇州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2005
【分類號】：R392

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本文編號：2305011