本文關(guān)鍵詞：重度病理分級IgA腎病的免疫抑制治療研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《大連醫(yī)科大學(xué)》 2012年

尿液蛋白質(zhì)組學(xué)在IgA腎病激素治療前后的比較

肖姣  

【摘要】：目的：研究初次診斷為IgA腎病(Immunoglobulin A nephropathy)患者應(yīng)用激素治療前后尿液蛋白質(zhì)質(zhì)譜特點，篩選出IgA腎病患者可能的差異性蛋白；同時對激素的療效進行評估，探討尿蛋白質(zhì)組學(xué)對疾病動態(tài)監(jiān)測的意義。 方法：留取健康人（n=6）、新診斷為IgA腎病并滿足應(yīng)用激素治療的患者（n=6）激素治療前后（應(yīng)用激素治療1個月后）的空腹?fàn)顟B(tài)下清潔中段晨尿標(biāo)本，為避免細(xì)菌滋長和蛋白質(zhì)酶解于1小時內(nèi)放置于-80℃冰箱保存?zhèn)溆谩Ｊ紫热〕?8份尿標(biāo)本，待常溫下完全溶解后將樣品放于離心機中，以4℃1500g×10minutes離心，取上清以去除尿液中的細(xì)胞碎片，然后將所取上清以4℃10000g×10minutes再次離心沉淀，以去除尿液中的其他微粒，取上清，用-20℃預(yù)冷過的有機溶劑（有機溶劑為乙醇與丙酮按體積1：1配制）按照標(biāo)本體積與有機溶劑體積比為4:1進行蛋白質(zhì)沉淀，置于-20℃過夜后，經(jīng)4℃25000×g離心30分鐘，棄上清液，將含尿液蛋白質(zhì)的沉淀物真空干燥濃縮并存于-20℃待用。濃縮干燥的尿蛋白沉淀物用磷酸鹽緩沖溶液（PBS）充分溶解后，用考馬斯亮藍(lán)染色法（Bradford）測定每份樣品中尿蛋白濃度，稱取每例樣品含1mg蛋白質(zhì)的混合固體，充分溶解后使用高效液相色譜法（C18吸附柱）除鹽，測的肽峰，獲取峰面積及含肽的混合溶液，真空干燥，最后將干燥后的樣品充分酶解，并將個樣品的的蛋白濃度調(diào)整為1μg/μl后進行HPLC-ESI-MS/MS分析，獲得的尿液蛋白質(zhì)多肽序列應(yīng)用Mascot Daemon軟件進行數(shù)據(jù)檢索，應(yīng)用庫為ipi_hunman_v3.71_reverse.fasta,所獲得的人尿蛋白序列號在Uniprot數(shù)據(jù)庫中檢索，，查詢目標(biāo)蛋白質(zhì)的名稱、作用等相關(guān)信息。 結(jié)果：1.6份健康人的尿液樣品中共鑒定出98種蛋白質(zhì)，經(jīng)手工驗證后，所有健康人的尿液樣品共同表達29種蛋白質(zhì)； 2.6份新診斷為IgA腎病患者激素治療前的尿液樣品中共鑒定出165種蛋白質(zhì)，所有IgA腎病患者激素治療前的尿液樣品共同表達11種蛋白質(zhì)；將這11種蛋白質(zhì)與健康人尿液所表達的蛋白質(zhì)進行比較，從中手工剔除相同蛋白質(zhì)，特異性表達10種蛋白，它們是：免疫球蛋白重鏈v-iii區(qū)（Ig heavy chain V-III region TEI）、Igγ2鏈C區(qū)（Ig gamma-2chain C region）、 а-1抗胰糜乳蛋白酶（Alpha-1-antichymotrypsin）、а-1抗胰蛋白酶（Alpha-1-antitrypsin）、維生素D結(jié)合蛋白（Vitamin D-binding protein）、血紅蛋白β鏈（Hemoglobin subunit beta）、免疫球蛋白IgG輕鏈（IGL@protein）、血漿銅藍(lán)蛋白（Ceruloplasmin）、IGK@protein、Anti-(ED-B) scFV和血清鐵傳遞蛋白（Serotransferrin） 結(jié)論:1.本實驗利用HPLC一ESI一MS/MS技術(shù)研究了IgA腎病患者的尿液蛋白質(zhì)譜特點，共得到165種蛋白質(zhì)，并與健康人尿液中表達的蛋白進行比較，手工剔除相同的蛋白質(zhì)，IgA腎病患者尿液中特異性表達的蛋免疫球蛋白重鏈v-iii區(qū)（Ig heavy chain V-III region TEI）、Igγ2鏈C區(qū)（Ig gamma-2chain C region）、а-1抗胰糜乳蛋白酶（Alpha-1-antichymotrypsin）、 а-1抗胰蛋白酶（Alpha-1-antitrypsin）、維生素D結(jié)合蛋白（Vitamin D-binding protein）、血紅蛋白β鏈（Hemoglobin subunit beta）、免疫球蛋白IgG輕鏈（IGL@protein）、血漿銅藍(lán)蛋白（Ceruloplasmin）、IGK@protein、Anti-(ED-B) scFV和血清鐵傳遞蛋白（Serotransferrin）可能成為IgA腎病的生物標(biāo)志物。 2.每例IgA腎病患者自身尿液在使用激素治療前后進行比較，發(fā)現(xiàn)尿液中蛋白的種類略有減少。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R692.31
【目錄】：

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