【摘要】：人胚胎多能性干細胞主要來源于胚泡內(nèi)細胞團和原始生殖細胞(primordial germ cells,PGCs),在體外經(jīng)抑制分化培養(yǎng)而得到的細胞系,其具有體外無限增殖能力和發(fā)育全能性等特征。人胚胎性干細胞的研究已成為當今生命科學領域內(nèi)最為熱門,最具活力,最為前沿的課題之一。人胚胎性干細胞研究的意義主要體現(xiàn)在:作為發(fā)育生物學的理想研究模型,可較為精確的了解人胚胎早期發(fā)育機制及相關調(diào)控因素;人胚胎性干細胞具有無限增殖和多向分化能力,能為組織工程和細胞工程提供無限的種子細胞,是細胞、組織、器官移植研究的基礎模型;胚胎性干細胞的遺傳可操作性,使之成為基因和細胞治療的載體模型等。事實上各國科學家都在通過各種渠道,投入巨資加快干細胞的研究。誰在此領域搶得失機,將會為全球社會經(jīng)濟發(fā)展和人民健康做出巨大貢獻。因此,建立胚胎干細胞系或者建立胚胎干細胞庫是當今各國研究者當務之急。 迄今為止,人胚胎性干細胞的研究主要集中在來源于胚泡內(nèi)細胞群的胚胎干細胞(embryonic stem cell,ESC)系的研究,且在已有研究中主要用鼠胚胎成纖維細胞作為培養(yǎng)人胚胎干細胞的飼養(yǎng)層,而以人胚胎成纖維細胞作為飼養(yǎng)層培養(yǎng)人胚胎干細胞的報道甚少。來源于原始生殖細胞的人胚胎生殖細胞(embryonic germ cell, EGC)系僅有一例建系成功,而國內(nèi)尚無成功建立 hEGCs 系的報道。因此,對于來源于原始生殖細胞的人胚胎生殖細胞的研究仍然具有十分重要的意義。 為了更深入的認識人 EG 細胞,我們進行了以下研究:1. 進一步研究了人胚胎原始生殖細胞的發(fā)生、遷移及表型特征。2. 采用低溫生物學技術,對第 6-8 周人胚胎生殖嵴原始生殖細胞進行冷凍、復蘇,探討低溫冷凍保存人胚胎原始生殖細胞的可行性。3.以第 3-5 月人胚胎肺為材料分離、純化、培養(yǎng)并鑒定人胚胎肺成纖維細胞,篩選絲裂霉素 C 抑制人胚胎肺成纖維細胞增殖的最佳作用時間和濃度。4. 以自行分離、培養(yǎng)的人胚胎肺成纖維細胞為飼養(yǎng)層細胞,分離和培養(yǎng)了人胚胎生殖細胞,并進行鑒定。5.在成功分離、培養(yǎng)和鑒定人 EG 細胞的同時,比較了 STO 細胞和人胚胎肺成纖維細胞作為飼養(yǎng)層細胞對人 EG細胞生長的影響。6. 采用分步法,以可溶性細胞因子組合為誘導劑,定向誘導人 EG 細胞向造血細胞分化,為胚胎干細胞的定向誘導分化和今后可能在臨床移植治療中的應用進行了初步探索。 1. 人胚胎原始生殖細胞的發(fā)生、遷移及表型特征: 采用石蠟切片、酶組織化學檢測堿性磷酸酶活性、免疫組化檢測階段特異性胚胎系列抗原(如 SSEA-1,SSEA-4 抗原)、RT-PCR 檢測轉(zhuǎn)錄因子 Oct-4 的表達等技術方法,研究 4.5-12 周人胚胎生殖嵴的組織結(jié)構(gòu)以及在遷移中的原始生殖細胞形態(tài)學特征及變化。旨在為深入認識人 PGCs 生物學特征和以生殖嵴為材料獲取人胚胎生殖細胞奠定基
[Abstract]:......
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2005
【分類號】：R329.2

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