【摘要】：本研究建立了一種基于新型再測序芯片(Resequencing Pathogen Microarray,RPM)的腹瀉癥候群多病原檢測方法,能同時檢測14種輪狀病毒,7種杯狀病毒,8種星狀病毒,28種腸道病毒,16種少見致瀉病毒。選取已驗證的陽性病毒樣本為模板來評估該方法的特異性。用克隆質(zhì)粒和體外轉(zhuǎn)錄的RNA梯度稀釋液來檢驗RPM的靈敏度,在20~2 000拷貝/μL水平時RPM仍能檢測和分辨出相近的病毒亞型。通過調(diào)整參考品的濃度優(yōu)化了陽性判定閾值,并改進了腸道病毒的檢測流程以完成分型。對10份不明原因腹瀉樣品進行了篩查,從中檢出6份腹瀉病毒陽性樣本。根據(jù)RPM結果對樣品進行了單重PCR并且測序,RPM與測序結果一致。本研究建立了一種高通量,高特異性,靈敏度較高的RPM方法,對于不明原因腹瀉病例的診斷和突發(fā)疫情的處理有巨大的應用價值。
[Abstract]:In this study, a novel multi-pathogen detection method for diarrhea syndrome based on a novel resequencing chip (Resequencing Pathogen Microarray,RPM was developed. It can detect 14 rotaviruses, 7 calix viruses, 8 stellate viruses and 28 enterovirus simultaneously. There are 16 rare diarrhea viruses. The specificity of the method was evaluated by using a validated positive virus sample as a template. The sensitivity of RPM was tested by cloning plasmid and in vitro transcription RNA gradient dilution solution. RPM could still detect and distinguish similar virus subtypes at 20 ~ 2 000 copies / 渭 L level. The positive detection threshold was optimized by adjusting the concentration of reference material, and the detection procedure of enterovirus was improved to complete the typing. Ten unexplained diarrhea samples were screened and 6 diarrhea virus positive samples were detected. The single PCR was sequenced according to the RPM results, and the RPM was consistent with the sequencing results. In this study, a high throughput, high specificity and high sensitivity RPM method was established, which has great application value in the diagnosis of unknown diarrhea cases and the treatment of sudden outbreaks.
【作者單位】： 中國疾病預防控制中心病毒病預防控制所;
【基金】：傳染病重大專項(2013ZX10004-001,2012ZX10004-215,2013ZX10004-202,2013ZX10004804-007)
【分類號】：R373

【參考文獻】

相關期刊論文 前4條

1 申紅衛(wèi);李瑾;王淼;張晨;王佶;聶凱;楊夢婕;張益;譚文杰;馬學軍;;一種基于新型再測序芯片的不明原因呼吸道感染樣品檢測方法的建立[J];病毒學報;2013年02期

2 徐建國;;發(fā)現(xiàn)新病原、建立新病原學的技術與理論體系[J];微生物與感染;2010年03期

3 王芳;;思密達聯(lián)合合生元益生菌治療小兒非感染性腹瀉療效分析[J];現(xiàn)代預防醫(yī)學;2012年11期

4 ;Detection and identification of intestinal pathogenic bacteria by hybridization to oligonucleotide microarrays[J];World Journal of Gastroenterology;2005年48期

【共引文獻】

相關期刊論文 前10條

1 王洪敏;何冬梅;周輝;柯碧霞;鄧小玲;朱海明;陳經(jīng)雕;黎薇;楊杏芬;柯昌文;;華南地區(qū)常見的8種食源性致病菌檢測基因芯片研制[J];南方醫(yī)科大學學報;2010年11期

2 郭延青;李丹地;段招軍;;A組輪狀病毒實時定量PCR檢測方法的研究進展[J];病毒學報;2013年06期

3 趙斌;萬繼紅;;思連康治療急性腹瀉病療效觀察[J];實用藥物與臨床;2013年11期

4 王運鐸;解范迪;;毛細管電泳法快速檢測金黃色葡萄球菌[J];檢驗醫(yī)學;2009年06期

5 高興;王景林;;基因芯片技術在病原細菌檢測中的應用[J];中國生物工程雜志;2010年02期

6 陳惠芳;姚月嫻;鄭雪燕;黃燕惠;熊益權;陳清;俞守義;;人類博卡病毒感染與急性胃腸炎發(fā)生風險的Meta分析[J];熱帶醫(yī)學雜志;2013年11期

7 任斌知;趙嶸;王乃昌;張凡非;劉元;;2012年太原市5歲以下住院嬰幼兒病毒性腹瀉的病原學及流行特征研究[J];實用醫(yī)技雜志;2013年12期

8 WANG Yan;ZHANG Tian Peng;XIAO Hong Li;QI Hai Yu;YIN Cheng Hong;;Formulation of an Early Warning Infectivity Score System for Adult Patients with Acute Bacterial Diarrhea[J];Biomedical and Environmental Sciences;2014年01期

9 王銳;倪大新;馮子健;孟玲;;中國傳染病實驗室網(wǎng)絡現(xiàn)狀分析[J];中國公共衛(wèi)生;2012年09期

10 王曄茹;徐瀟;崔生輝;李鳳琴;;多位點可變數(shù)量串聯(lián)重復序列分析在細菌分子分型中的應用[J];中國食品衛(wèi)生雜志;2013年02期

相關博士學位論文 前1條

1 郭英;兒童呼吸道、中樞神經(jīng)系統(tǒng)和腹瀉病相關病毒感染的病原研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2013年

相關碩士學位論文 前4條

1 潘文婷;糞腸球菌感染牙本質(zhì)小管的激光共聚焦顯微鏡觀察[D];中南大學;2011年

2 鄭遠明;腹瀉病人感染金黃色葡萄球菌的快速檢測[D];大連醫(yī)科大學;2008年

3 柳彩霞;小兒腹瀉7種病毒性病原感染的研究[D];新疆醫(yī)科大學;2013年

4 徐潞君;luminex xMAP技術在慢性賢臟病腎組織AKT/mTOR信號通路中的應用[D];中南大學;2013年

【二級參考文獻】

相關期刊論文 前10條

1 李瑾;毛乃穎;秦萌;胡秀梅;楊夢婕;王淼;張晨;許文波;馬學軍;;GeXP多重PCR技術同時檢測12種常見呼吸道病毒[J];病毒學報;2011年06期

2 闞飆,徐建國;傳染病監(jiān)測的實驗室網(wǎng)絡化[J];疾病監(jiān)測;2005年01期

3 宋冰潔;;思密達治療小兒腹瀉療效分析[J];實用臨床醫(yī)學;2010年08期

4 張興春;;喜炎平聯(lián)合思密達治療小兒腹瀉療效觀察[J];臨床醫(yī)藥實踐;2011年07期

5 童春全;;思密達聯(lián)合慶大霉素保留灌腸在小兒腹瀉治療中的效果研究[J];實用心腦肺血管病雜志;2010年07期

6 徐建國,楊紅梅,吳紀民,賴心河,劉秉陽;從一例多細菌協(xié)同性壞疽的標本中分離到肉桿菌細菌[J];微生物學報;2000年01期

7 李志紅,岳林,王穎麗,樸蓉實;思密達治療嬰幼兒急性病毒性腹瀉100例療效觀察[J];中國婦幼保健;2005年12期

8 劉泳江;郁傳民;;貝飛達聯(lián)合思密達治療小兒腹瀉療效觀察[J];中國社區(qū)醫(yī)師(醫(yī)學專業(yè));2011年11期

9 周賢剛,鐘渠,李銳;雙歧三聯(lián)活菌片治療小兒腹瀉的Meta分析[J];中華兒科雜志;2005年06期

10 徐建國,程伯鯤,馮麗萍,景懷琦,楊晉川,趙廣法,汪華,李洪衛(wèi);腸出血性大腸埃希菌O157∶H7引起的溶血性尿毒綜合征患者血清抗體調(diào)查[J];中華流行病學雜志;2002年02期

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 焉晉絢,劉靜敏,戈士文;秋季嬰兒腹瀉病原體觀察[J];鄭州大學學報(醫(yī)學版);1989年03期

2 胥愛源;;小雙殼腹瀉病毒的發(fā)現(xiàn)及初步研究[J];電子顯微學報;1984年03期

3 王國良;思茅發(fā)生一起不明原因的家棲鼠集中死亡現(xiàn)象[J];中國媒介生物學及控制雜志;1996年05期

4 Orkin SH ,李焰生;反向遺傳學與人類疾病[J];國際遺傳學雜志;1987年05期

5 伍碧雯;陳炯然;連建華;陳思東;;廣州地區(qū)某農(nóng)場犢牛Q熱病原學鑒定[J];廣東藥學院學報;1990年02期

6 李R，

本文編號：2296886