【摘要】：[目的] 通過建立食物過敏模型,確立并優(yōu)化sIgE和組胺定向釋放的檢測方法,為臨床提供可替代皮內(nèi)試驗的持異、靈敏、安全的多過敏原體外診斷過敏癥技術(shù),并為重組表達過敏原,實現(xiàn)過敏原的標(biāo)準(zhǔn)化作前期研究。 [方法] 制備牛奶、蟹和鱉等幾種常見的食物過敏原,建立食物過敏癥動物模型,間接ELISA法檢測抗血清中特異性IgE和IgG水平,熒光法測定致敏腹腔肥大細(xì)胞的組胺定向釋放,免疫印跡分析過敏原的過敏組分,飽和硫酸銨分段赫析法分離純化過敏組分。 [結(jié)果] 用乳清蛋白和蟹蛋白免疫BALB/c小鼠成功建立了食物過敏模型,模型組小鼠血清sIgE和組胺水平均比對照組明顯升高。用氫氧化鋁作佐劑,以皮下注射途徑免疫小鼠獲得了理想的免疫效果。連續(xù)兩代用不含牛奶或奶制品的特制飼料飼養(yǎng)的小鼠sIgE水平低,顯示了特制飼料對過敏模型構(gòu)建的重要性。激發(fā)后第14d的定向組胺釋放率顯示組胺的測定與sIgE檢測結(jié)果具有良好的一致性。 [結(jié)論] 腹腔肥大細(xì)胞體外定向組胺釋放率和sIgE水平檢測可用于食物過敏原鑒定與評價,對研究食物過敏癥的診斷和治療具有十分重要的意義,亦可用于轉(zhuǎn)基因食物蛋白過敏原的檢測。
[Abstract]:[objective] to establish and optimize the detection method of sIgE and histamine directional release by establishing food allergy model, and to provide a reliable, sensitive and safe technique for the in vitro diagnosis of allergy with multiple allergens, which can be used as a substitute for intradermal test. And for the recombination of the expression of allergens and achieve the standardization of allergens for the preliminary study. [methods] several common food allergens such as milk, crab and turtle were prepared, and animal models of food hypersensitivity were established. Specific IgE and IgG levels in antiserum were detected by indirect ELISA assay. Histamine release from sensitized peritoneal mast cells was determined by fluorescence method. The allergy components of the allergen were analyzed by Western blotting, and the anaphylaxis was isolated and purified by saturated ammonium sulfate. [results] BALB/c mice were immunized with whey protein and crab protein. The serum sIgE and histamine levels in the model group were significantly higher than those in the control group. Using aluminum hydroxide as adjuvant, the mice were immunized by subcutaneous injection. The low sIgE level of mice fed with special feed without milk or dairy products for two consecutive generations showed the importance of special feed for the construction of allergic model. The release rate of directed histamine on the 14th day after excitation showed a good agreement with the results of sIgE. [conclusion] the detection of specific histamine release rate and sIgE level of peritoneal mast cells in vitro can be used to identify and evaluate food allergens, and it is of great significance to study the diagnosis and treatment of food allergies. It can also be used for the detection of protein allergens in genetically modified foods.
【學(xué)位授予單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2005
【分類號】：R392.1

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本文編號：2267170