【摘要】：目的制備含人骨形態(tài)發(fā)生蛋白-2(hBMP-2)基因的真核表達(dá)質(zhì)粒,獲得可穩(wěn)定高效表達(dá)BMP-2的兔骨髓基質(zhì)細(xì)胞,為進(jìn)一步研究BMP-2在骨牽張區(qū)的成骨作用作準(zhǔn)備。方法制備攜帶有hBMP-2的全長真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3.1-BMP2。通過脂質(zhì)體法將所得到的重組真核質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到兔骨髓基質(zhì)細(xì)胞中,用G418進(jìn)行梯度篩選,從而得到能夠穩(wěn)定表達(dá)hBMP-2的細(xì)胞克隆。采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測(cè)骨髓基質(zhì)細(xì)胞(MSCs)hBMP-2 mRNA的表達(dá)。結(jié)果重組質(zhì)粒通過EcoRI酶切后,電泳圖示約1.5 kb的hBMP-2的目的片段及5.5 kb的載體片段,經(jīng)測(cè)序顯示核苷酸序列正確無誤。經(jīng)RT-
[Abstract]:Objective to prepare eukaryotic expression plasmid containing human bone morphogenetic protein-2 (hBMP-2) gene and obtain rabbit bone marrow stromal cells which can express BMP-2 stably and efficiently in order to further study the osteogenesis of BMP-2 in distraction zone. Methods the full-length eukaryotic expression plasmid pcDNA3.1-BMP2. carrying hBMP-2 was prepared. The recombinant eukaryotic plasmid was transfected into rabbit bone marrow stromal cells by liposome method, and then G418 was used for gradient screening to obtain the cell clones which could express hBMP-2 stably. The expression of (MSCs) hBMP-2 mRNA in bone marrow stromal cells was detected by reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR). Results after the recombinant plasmid was digested by EcoRI, the target fragment of about 1.5 kb hBMP-2 and the vector fragment of 5.5 kb were shown by electrophoresis. The sequence showed that the nucleotide sequence was correct. Via RT-
【作者單位】： 東南大學(xué)附屬中大醫(yī)院整形外科 東南大學(xué)附屬中大醫(yī)院整形外科
【基金】：江蘇省衛(wèi)生廳重大項(xiàng)目基金資助(H200201)
【分類號(hào)】：R346

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

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【相似文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2264292