【摘要】：前言 骨髓基質(zhì)細(xì)胞(Bone marrow stromal cells, BMSCs)是骨髓內(nèi)的非造血干細(xì)胞,是造血干細(xì)胞分化增殖微環(huán)境的重要組成部分,具有自我更新和多向分化潛能,可以向多種來(lái)源于外胚層和中胚層的組織分化,形成骨、軟骨、肌腱、脂肪和神經(jīng)等組織細(xì)胞。在特定誘導(dǎo)條件下可轉(zhuǎn)化為神經(jīng)干細(xì)胞,并繼續(xù)向神經(jīng)元、星型膠質(zhì)細(xì)胞和少突膠質(zhì)細(xì)胞等細(xì)胞分化。另外有研究表明BMSCs能夠通過(guò)血腦屏障,在腦中成活并遷移,促進(jìn)多種神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的分泌,減少腦內(nèi)細(xì)胞壞死和凋亡,促進(jìn)腦創(chuàng)傷后神經(jīng)功能的恢復(fù),從而使得“自體骨髓源性神經(jīng)干細(xì)胞”在中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的研究及應(yīng)用成為可能,深入研究骨髓基質(zhì)細(xì)胞的體外分化調(diào)控機(jī)制具有重要的臨床意義。目前體外定向誘導(dǎo)骨髓基質(zhì)細(xì)胞分化為神經(jīng)元樣細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)條件尚未成熟,誘導(dǎo)分化率較低。因此,本實(shí)驗(yàn)從成年大鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞的分離、純化及擴(kuò)增方案的實(shí)驗(yàn)參數(shù)優(yōu)化出發(fā),探討NT3與TGF-β聯(lián)合誘導(dǎo)骨髓基質(zhì)細(xì)胞向神經(jīng)細(xì)胞方向分化的可行性,為骨髓基質(zhì)細(xì)胞的體外分化研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 材料與方法 1.1 主要試劑和儀器MSCGM培養(yǎng)基,TGF-β,NT3,bFGF(Hyclone公司),兔抗大鼠CD34,CD44單克隆抗體,Nestin、NSE、β-catenin、GFAP(Sigma公司),胰蛋白酶,胎牛血清,辣根酶標(biāo)記鏈親和素,DAB顯色液,封閉用山羊血清,二抗試劑盒(華美公司)。CO_2恒溫培養(yǎng)箱,生物凈化工作臺(tái),離心機(jī),干燥箱,組化常用器皿,Olympus CK40倒置顯微鏡。 1.2 骨髓基質(zhì)細(xì)胞的分離、培養(yǎng)和鑒定在無(wú)菌條件下取1個(gè)月齡Wistar大鼠股骨和脛骨的骨髓細(xì)胞做原代培養(yǎng)。根據(jù)骨髓基質(zhì)細(xì)胞與其他細(xì)胞的密度不同而采用Percoll分離液將其分離,根據(jù)細(xì)胞貼壁不同,篩選易
[Abstract]:Bone marrow stromal cells (Bone marrow stromal cells, BMSCs) are non-hematopoietic stem cells in bone marrow and an important part of microenvironment for differentiation and proliferation of hematopoietic stem cells. It has the potential of self-renewal and multi-differentiation, and can differentiate into various tissues from ectoderm and mesoderm, forming bone, cartilage, tendon, fat and nerve tissue cells. Under certain induction conditions, neural stem cells can be transformed into neural stem cells and continue to differentiate into neurons, astrocytes and oligodendrocytes. In addition, some studies have shown that BMSCs can survive and migrate in the brain through the blood-brain barrier, promote the secretion of various neurotrophic factors, reduce the necrosis and apoptosis of brain cells, and promote the recovery of neural function after brain trauma. This makes it possible to study and apply autologous bone marrow-derived neural stem cells in central nervous system diseases, and it is of great clinical significance to study the mechanism of differentiation and regulation of bone marrow stromal cells in vitro. At present, the condition of inducing bone marrow stromal cells to differentiate into neuron-like cells in vitro is not mature, and the rate of differentiation is low. Therefore, the feasibility of NT3 combined with TGF- 尾 inducing the differentiation of bone marrow stromal cells into neural cells was discussed from the experimental parameters of isolation, purification and amplification of bone marrow stromal cells from adult rats. To provide experimental basis for in vitro differentiation of bone marrow stromal cells. Materials and methods 1. 1 the main reagent and instrument MSCGM medium: TGF- 尾 nt3bFGF (Hyclone), rabbit anti-rat CD34,CD44 monoclonal antibody NSE, 尾 -cateninine GFAP (Sigma), trypsin, fetal bovine serum. Horseradish enzyme labeled chain avidin dab chromogenic solution, goat serum, second antibody kit (Huamei company). COS2 constant temperature incubator, biological purification table, centrifuge, drier, histochemical utensils, Olympus CK40 inverted microscope. 1.2 Bone marrow stromal cells were isolated, cultured and identified under aseptic conditions. Bone marrow cells from femur and tibia of 1 month old Wistar rats were taken for primary culture. According to the density of bone marrow stromal cells and other cells, the Percoll isolate was used to isolate them. According to the different adherent cells, it was easy to screen.
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類(lèi)號(hào)】：R329.2

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本文編號(hào)：2258282