【摘要】：LiHTA—高絲氨酸氧乙酰轉(zhuǎn)移酶(Homoserinc O-acetyltransferase，HTA，EC2．3．1．31)是在微生物和植物體內(nèi)甲硫氨酸的生物合成途徑中的第一個酶。它催化乙酰輔酶A的乙�；D(zhuǎn)移到高絲氨酸上，這是一個兩步的乒乓反應(yīng)機(jī)制。我們用硒的單波長反常衍射的方法解析了來源于Leptospira interrogans——一種強(qiáng)致病性的鉤端螺旋體——的HTA的分辨率為2.2(?)的晶體結(jié)構(gòu)。HTA結(jié)構(gòu)是由兩個獨(dú)立的結(jié)構(gòu)域組成，一個核心的a／β結(jié)構(gòu)域，包含有催化位點，另一個是由a螺旋束構(gòu)成的Lid結(jié)構(gòu)域。整體上來說，這種折疊方式屬于a／β水解酶超家族，特征是該家族的活性位點的催化三聯(lián)體位于結(jié)構(gòu)的特定loop上。我們的精細(xì)結(jié)構(gòu)發(fā)現(xiàn)催化三聯(lián)體的組氨酸和絲氨酸都是處于兩種構(gòu)象，并且與催化相關(guān)的殘基的構(gòu)象很多具有較大的柔性。根據(jù)我們的結(jié)果我們給出了一個更為精細(xì)的推測的反應(yīng)機(jī)理，其中組氨酸雙構(gòu)象起到了決定性的作用。 hCLP—人的肌動蛋白輔助蛋白類似蛋白(Human coactosin-like protein，，hCLP)是一種肌動蛋白絲的結(jié)合蛋白，它與肌動蛋白單體沒有結(jié)合作用。它與5—磷脂酶無論在體外還是體內(nèi)都有結(jié)合作用，在調(diào)節(jié)肌動蛋白和5—磷脂酶的活性方面起到了重要的作用。帽子蛋白阻礙肌動蛋白的多聚，而肌動蛋白輔助蛋白可以阻礙帽子蛋白的活性，但是肌動蛋白輔助蛋白本身對肌動蛋白的聚合或者解聚都沒有任何影響。我們用硒的多波長反常衍射的方法解析了hCLP的晶體結(jié)構(gòu)。該結(jié)構(gòu)表明它與ADF—H結(jié)構(gòu)域有著高度的結(jié)構(gòu)相似性，盡管一級序列同源性非常低。我們發(fā)現(xiàn)一些保守的疏水殘基很可能對這種折疊同源性有重要貢獻(xiàn)。該結(jié)構(gòu)表明CLP以一種非常不同于ADF／Cofilin家族的方式與肌動蛋白絲結(jié)合。結(jié)合之前的突變研究，我們分別分析了CLP與肌動蛋白絲和5—磷脂酶的結(jié)合位點。這兩個結(jié)合位點在空間上非常的接近，很可能就此排除了肌動蛋白絲和5—磷脂酶同時結(jié)合到CLP上的可能性。
[Abstract]:LiHTA-homoserinc O-acetyltransferase (HTA, EC2.3.1.31) is the first enzyme in the biosynthetic pathway of methionine in microorganisms and plants. It catalyzes the acetyltransference of acetyl coenzyme A to homoserine, a two-step ping-pong reaction mechanism. We used a single wavelength trans of selenium. The crystal structure of HTA derived from Leptospira interrogans, a highly pathogenic leptospira, has a resolution of 2.2 (?). The HTA structure consists of two independent domains, one core a/beta domain containing catalytic sites and the other a helix beam composed of a Lid domain. In general, this folding pattern belongs to the a/beta hydrolase superfamily and is characterized by the fact that the catalytic triplets of the active sites of the family are located on specific loops of the structure. Based on our results, we present a more delicate speculative reaction mechanism in which the histidine diconformation plays a decisive role.
HCLP-human actin-like protein (hCLP) is a binding protein of actin filament, which does not bind to actin monomer. It binds to 5-phospholipase both in vitro and in vivo and plays an important role in regulating the activity of actin and 5-phospholipase. Cap proteins inhibit the aggregation of actin, and actin-cofactor proteins inhibit the activity of cap proteins, but actin-cofactor proteins themselves have no effect on the aggregation or depolymerization of actin. We analyzed the crystal structure of hCLP by means of selenium multi-wavelength anomalous diffraction. We found that some conserved hydrophobic residues are likely to contribute significantly to this folding homology. This structure indicates that CLP binds to actin filaments in a very different way from the ADF/Cofilin family. We analyzed the binding sites of CLP with actin filament and 5-phospholipase respectively. These two binding sites are very close in space, which may exclude the possibility of actin filament and 5-phospholipase binding to CLP simultaneously.
【學(xué)位授予單位】：中國科學(xué)技術(shù)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類號】：R377.5

【共引文獻(xiàn)】

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2 李泉;蛋白質(zhì)局部結(jié)構(gòu)—局部序列統(tǒng)計勢的構(gòu)建以及RNA結(jié)合位點的預(yù)測[D];中國科學(xué)技術(shù)大學(xué);2008年

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1 賈佳;環(huán)氧化物水解酶序列識別和分類模型的構(gòu)建[D];浙江大學(xué);2006年

2 單萍;CLP基因的克隆、表達(dá)及生化特性的研究[D];東北師范大學(xué);2009年

3 吳進(jìn)珍;并行蟻群優(yōu)化在蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)預(yù)測中的應(yīng)用研究[D];蘇州大學(xué);2010年

本文編號：2243437