發(fā)布時間：2018-09-13 07:02

【摘要】：目的:FK506結合蛋白12.6(FK506 binding protein 12.6,FKBP12.6),屬于FKBP蛋白家族成員之一,是免疫抑制劑FK506的胞內作用靶點。FKBP12.6由108個氨基酸組成,分子量為12.6KD,生理狀態(tài)下能夠與內質網和肌漿網上的RyR2結合,穩(wěn)定鈣離子通道,進而減少內質網和肌漿網中鈣離子外泄;同時FKBP12.6與FK506結合,則可抑制鈣調磷酸酶(CaN)活性,從而抑制免疫反應。FKBP12.6主要分布于心肌、腦組織和平滑肌等。FKBP12.6在中樞神經系統(tǒng)有著廣泛的表達,包括一些與學習記憶相關的腦區(qū),如海馬、杏仁核;然而,其在學習記憶方面的功能還不清楚。本文旨在研究FKBP12.6敲除對新物體識別記憶、物體位置識別記憶及條件恐懼記憶的影響,并從電生理和蛋白表達方面探討其可能的作用機制。方法:1.對小鼠尾部DNA進行基因鑒定,判斷其是否成功敲除FKBP12.6基因。2.依據小鼠對新事物的探究特性建立實驗模型,研究FKBP12.6敲除小鼠和WT(野生型)小鼠在新物體識別記憶和物體位置識別記憶上的差異。3.通過依據巴甫洛夫條件反射原理建立的恐懼記憶測試系統(tǒng),研究FKBP12.6敲除小鼠和WT小鼠在條件恐懼記憶上的差異。4.通過膜片鉗技術,研究FKBP12.6敲除小鼠和WT小鼠杏仁核神經元在電生理性質上的差異。5.通過免疫組化方法,研究FKBP12.6敲除小鼠和WT小鼠記憶相關腦區(qū)c-fos蛋白表達水平的差異。結果:1.實驗中所用的小鼠確定已成功敲除FKBP12.6基因。2.與WT小鼠相比,FKBP12.6敲除小鼠的新物體識別記憶、物體位置識別記憶和條件恐懼記憶均下降。3.與WT小鼠相比,FKBP12.6敲除小鼠腦部杏仁核區(qū)域微小抑制性突觸后電位(miniature inhibitory excitatory post synaptic potential,mIPSP)的頻率沒有顯著變化,微小興奮性突觸后電位(miniature excitatory post synaptic potential,mEPSP)的頻率顯著下降。4.與WT小鼠相比,FKBP12.6敲除小鼠腦部杏仁核區(qū)域c-fos蛋白表達水平明顯下降。結論:FKBP12.6基因敲除會損傷小鼠的新物體識別記憶、物體位置識別記憶和條件恐懼記憶;初步結果表明杏仁核mEPSP和c-fos蛋白表達水平的變化可能與條件恐懼記憶的損傷有關。
[Abstract]:Objective: FK506 binding protein 12.6 (FK506 binding protein 12.6FKBP12.6), a member of FKBP protein family, is the intracellular target of immunosuppressant FK506. FKBP12.6 is composed of 108 amino acids and has a molecular weight of 12.6KD. in physiological state, it can bind to endoplasmic reticulum (ER) and sarcoplasmic reticulum (RyR2). Calcium channel can be stabilized to reduce the leakage of calcium ions in endoplasmic reticulum and sarcoplasmic reticulum, meanwhile, FKBP12.6 combined with FK506 can inhibit the activity of calmodulin (CaN), thus inhibit the immune response. FKBP12.6 mainly distributes in myocardium. FKBP12.6 is widely expressed in the central nervous system, including some brain regions related to learning and memory, such as hippocampus and amygdala, but its function in learning and memory is not clear. The purpose of this paper is to study the effects of FKBP12.6 knockout on new object recognition memory, object position recognition memory and conditional fear memory, and to explore the possible mechanism of FKBP12.6 knockout in terms of electrophysiology and protein expression. Method 1: 1. The mouse tail DNA gene was identified to determine whether it successfully knocked out the FKBP12.6 gene. 2. An experimental model was established to study the difference between FKBP12.6 knockout mice and WT mice in new object recognition memory and object position recognition memory. The fear memory test system based on Pavlov's conditioned reflex principle was established to study the difference of conditional fear memory between FKBP12.6 knockout mice and WT mice. The electrophysiological properties of amygdala neurons in FKBP12.6 knockout mice and WT mice were studied by patch clamp technique. The difference of c-fos protein expression in memory related brain region between FKBP12.6 knockout mice and WT mice was studied by immunohistochemical method. The result is 1: 1. The mice used in the experiment confirmed that they had successfully knocked out the FKBP12.6 gene. 2. 2. Compared with WT mice, the new object recognition memory, object position recognition memory and conditional fear memory of FKBP12.6 knockout mice decreased by .3. Compared with WT mice, the frequency of (miniature inhibitory excitatory post synaptic potential,mIPSP) in the amygdala region of FKBP12.6 knockout mice was not significantly changed, but the frequency of (miniature excitatory post synaptic potential,mEPSP) was significantly decreased by .4.The frequency of (miniature excitatory post synaptic potential,mEPSP in the brain of FKBP12.6 knockout mice was significantly lower than that of FKBP12.6 knockout mice. Compared with WT mice, the expression of c-fos protein in the amygdala of FKBP12.6 knockout mice decreased significantly. Conclusion the new object recognition memory, the object position recognition memory and the conditioned fear memory can be damaged by the knockout of the 1: FKBP12.6 gene, and the preliminary results indicate that the changes of mEPSP and c-fos protein expression levels in the amygdala may be related to the damage of conditioned fear memory.
【學位授予單位】：南昌大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R338.64

【相似文獻】

相關期刊論文 前6條

1 ;科學家發(fā)現(xiàn)調控恐懼記憶的關鍵因素[J];廣西科學;2008年03期

2 ;中國科學家對“恐懼記憶形成機制”有新發(fā)現(xiàn)[J];發(fā)明與創(chuàng)新(綜合科技);2010年02期

3 ;科學家發(fā)現(xiàn)人腦“恐懼記憶”的“罪魁禍首”[J];生命科學儀器;2010年01期

4 白楊;;關閉恐懼記憶之門——訪臺灣成功大學醫(yī)學院副院長簡伯武[J];科學中國人;2008年07期

5 金新春;馬朝林;李葆明;;α_(2A)腎上腺素受體激動劑guanfacine增強大鼠空間學習能力而不影響條件性恐懼記憶(英文)[J];生理學報;2007年06期

6 ;[J];;年期

相關會議論文 前2條

1 劉欣秋;金新春;李葆明;;杏仁核基底外側核β-受體參與恐懼記憶的再鞏固[A];中國生理學會第六屆全國青年生理學工作者學術會議論文摘要[C];2003年

2 齊雪蓮;李葆明;;激活海馬CA1區(qū)β-受體損害場景恐懼記憶的讀出[A];中國生理學會第六屆全國青年生理學工作者學術會議論文摘要[C];2003年

相關重要報紙文章 前10條

1 記者 熊燕;昆明動物所找到調控恐懼記憶關鍵[N];云南日報;2009年

2 通訊員 孫國根　記者 姜澎;蛋白質參與制造“恐懼記憶”[N];文匯報;2010年

3 記者 孫國根;恐懼記憶形成機制研究有新發(fā)現(xiàn)[N];健康報;2010年

4 本報記者 譚娜;復旦大學 發(fā)現(xiàn)恐懼記憶密碼[N];北京科技報;2010年

5 本報記者　戴敦峰;恐懼記憶的最新秘密[N];南方周末;2005年

6 李天舒;5—羥色胺缺乏導致恐懼記憶增強[N];健康報;2008年

7 白毅;我國學者發(fā)現(xiàn)：5—羥色胺是調控恐懼記憶的關鍵因素[N];中國醫(yī)藥報;2008年

8 金雯玨 記者 王春;恐懼記憶機制研究取得突破[N];科技日報;2005年

9 記者 劉石磊;恐懼癥或源于祖先恐懼記憶[N];新華每日電訊;2013年

10 本報見習記者 樊江云;中國科學家揭開恐懼之謎[N];北京科技報;2005年

相關博士學位論文 前6條

1 王燦明;SKF83959和IGF2對小鼠恐懼記憶消散和抑郁樣行為的作用及機制[D];華中科技大學;2015年

2 金新春;糖皮質激素受體與新蛋白質合成在聲音條件化恐懼記憶再鞏固及消退中的作用[D];復旦大學;2007年

3 張雪寒;大鼠海馬和杏仁體記憶相關受體和基因的研究[D];復旦大學;2005年

4 蔣麗珠;海馬Racl活性與場景恐懼記憶的維持及遺忘[D];中南大學;2014年

5 陳桂芬;海馬CA1神經元網絡對驚嚇恐懼記憶的編碼[D];華東師范大學;2007年

6 馮婷;CCK系統(tǒng)在創(chuàng)傷后應激障礙大鼠條件恐懼記憶中的作用及其機制研究[D];河北醫(yī)科大學;2014年

相關碩士學位論文 前8條

1 郭呈斌;足底電擊誘導樹，

本文編號：2240421