【摘要】：N-V蛋白酶(商品名:溶栓素)具有良好的溶栓作用。明確其生物學(xué)性質(zhì)及溶解血栓的機理,對于它將來可能的臨床應(yīng)用意義重大。N-V蛋白酶提純工藝的成熟,使提取產(chǎn)品的純度達(dá)到了較高水平[中國國家知識產(chǎn)權(quán)局專利公開(公告)號:1500873];日本秋田大學(xué)生化系Toshihiro sugiyama教授對其進(jìn)行氨基酸序列分析,測出了部分序列。提交SWISSPROT后得出結(jié)果認(rèn)定為一種新的蛋白酶,并推測其可能是一種絲氨酸蛋白酶并且在氨基端有糖基化等保護(訪問號:P8343);N-V蛋白酶可以溶解血栓等性質(zhì)是進(jìn)一步研究的工作基礎(chǔ),也是立題依據(jù)。為研究其溶栓作用的機理,本研究創(chuàng)新性地利用了電泳技術(shù),使N-V蛋白酶的純度提高到了97.57%,為進(jìn)一步研究創(chuàng)造了有利條件。在研究N-V蛋白酶對牛纖溶酶原的激活作用過程中發(fā)現(xiàn)了N-V蛋白酶可以將S2251這一以往被認(rèn)為是纖溶酶特異性底物水解,進(jìn)而找到了一種可以對N-V蛋白酶活性進(jìn)行準(zhǔn)確測定的顯色底物。通過平板法對比N-V蛋白酶和尿激酶的纖溶酶原激活作用時發(fā)現(xiàn)二者間的作用機制明顯不同,結(jié)合N-V蛋白酶水解白蛋白、酪蛋白、牛纖維蛋白、人纖維蛋白的水解產(chǎn)物在SDS-PAGE上的結(jié)果可以初步判斷:N-V蛋白酶沒有發(fā)揮纖溶酶原激活劑的作用,而是直接將蛋白底物水解成氨基酸。經(jīng)過N-V蛋白酶水解insulin-B鏈,對其產(chǎn)物衍生化后進(jìn)行氨基酸分析證實了上述判斷。作者還對N-V蛋白酶進(jìn)行了糖蛋白鑒定、酶學(xué)分類和外切酶性質(zhì)研究。得出以下結(jié)論:①N-V蛋白酶非糖蛋白類,在酶學(xué)分類上它屬于絲氨酸蛋白酶類。②N-V蛋白酶是一種氨基肽酶。③N-V蛋白酶不是纖溶酶原激活劑,它在溶栓過程中發(fā)揮直接纖溶作用。④據(jù)N-V蛋白酶已知酶學(xué)特性,可以確認(rèn)它是一種新的氨基肽酶。這使得絲氨酸蛋白酶家族的成員得到進(jìn)一步豐富。⑤N-V蛋白酶具有良好的水解蛋白質(zhì)性質(zhì),所以可以用于蛋白質(zhì)氨基酸測定以及核酸提取時溶解蛋白質(zhì)的工具酶。
[Abstract]:N-V protease (trade name: thrombolytic hormone) has good thrombolytic effect. It is of great significance to clarify its biological properties and the mechanism of thrombolysis, which is of great significance to the future clinical application of the purification process of .N-V protease. The purity of the extracted product reached a high level [patent disclosure (announcement) no.: 1500873] of the State intellectual property Office of China, and amino acid sequence analysis was carried out by Professor Toshihiro sugiyama of the Department of Biochemistry of Akita University, Japan, and some of the sequences were detected. After SWISSPROT was submitted, the results were identified as a new protease, and it was speculated that it might be a serine protease and protected by glycosylation at the amino end (visit No.: P8343). The properties of N-V protease that can dissolve thrombus are the basis of further study. It is also the basis for setting the subject. In order to study the mechanism of thrombolytic effect, the electrophoretic technique was used to improve the purity of N-V protease to 97.57, which created favorable conditions for further study. In the course of studying the activation of bovine plasminogen by N-V protease, it was found that N-V protease could hydrolyze S2251, which was previously regarded as plasminase-specific substrate. Furthermore, a color developing substrate which can accurately determine the activity of N-V protease was found. When the plasminogen activation of N-V protease and urokinase was compared by plate method, it was found that the mechanism of plasminogen activation between N-V protease and urokinase was obviously different, which combined with N-V protease to hydrolyze albumin, casein and bovine fibrin. The hydrolysis product of human fibrin on SDS-PAGE can be preliminarily judged that the protein substrate was directly hydrolyzed into amino acid instead of plasminogen activator. The insulin-B chain was hydrolyzed by N-V protease, and the results were confirmed by amino acid analysis. The identification of glycoprotein, enzymatic classification and exonuclease properties of N-V protease were also studied. The following conclusions are drawn: 1: 1N-V protease is a kind of aminopeptidase. 3N-V protease is not a plasminogen activator, and it belongs to serine protease class. 2N-V protease is a kind of aminopeptidase. It plays a direct fibrinolysis in thrombolytic process. According to the known enzymatic properties of N-V protease, it can be confirmed that it is a new aminopeptidase. This makes the members of the serine protease family further enriched. 5N-V protease has good hydrolytic protein properties, so it can be used for the determination of protein amino acids and the enzyme for dissolving protein in nucleic acid extraction.
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類號】：R341

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本文編號：2239121