【摘要】：目的分析人源化抗CD20單克隆抗體的理化性質(zhì),并初步篩選其結(jié)晶條件。方法分別采用還原、非還原SDS-PAGE及高效液相體積排阻色譜(size exclusive chromatography-HPLC,SEC-HPLC)法檢測(cè)抗體純度;還原SDSPAGE測(cè)定抗體輕重鏈相對(duì)分子質(zhì)量;毛細(xì)管電泳測(cè)定抗體等電點(diǎn);高效液相陽(yáng)離子交換色譜(ion exchange chromatographyHPLC,IEC-HPLC)法檢測(cè)抗體電荷異質(zhì)體含量;懸滴氣相擴(kuò)散法初步篩選抗體的結(jié)晶條件。結(jié)果人源化抗CD20單克隆抗體的非還原SDS-PAGE純度為100%,還原SDS-PAGE純度(輕鏈+重鏈)為100%,重鏈、輕鏈相對(duì)分子質(zhì)量分別為58 000和27 000,SFC-HPLC純度為99.2%;等電點(diǎn)為9.2;抗體表面電荷分布較均一;得到的蛋白晶體為孿晶,分辨率約為8埃。結(jié)論該抗體的純度達(dá)到結(jié)晶要求,以其理化性質(zhì)為基礎(chǔ),初步篩選出了結(jié)晶條件,為其結(jié)構(gòu)和功能的研究奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:Objective to analyze the physicochemical properties of humanized anti-CD20 monoclonal antibody and to screen its crystallization conditions. Methods the purity of antibody was detected by reductive, non-reduced SDS-PAGE and high performance liquid phase exclusion chromatography (size exclusive chromatography-HPLC,SEC-HPLC), the relative molecular weight of light and light chain of antibody was determined by reductive SDSPAGE, the isoelectric point of antibody was determined by capillary electrophoresis. High performance liquid phase cation exchange chromatography (ion exchange chromatographyHPLC,IEC-HPLC) was used to detect the charge heterogeneity of antibody, and the crystallization conditions of antibody were preliminarily screened by suspension gas phase diffusion method. Results the purity of non-reducing SDS-PAGE of humanized monoclonal antibody against CD20 was 100, the purity of reductive SDS-PAGE (light chain heavy chain) was 100, the relative molecular weight of heavy chain and light chain was 58 000 and 27 000 respectively, the purity of SFC-HPLC was 99.2, the isoelectric point was 9.2, the surface charge distribution of antibody was uniform. The obtained protein crystal is twinned with a resolution of about 8 A. Conclusion the purity of the antibody can meet the requirements of crystallization. Based on its physical and chemical properties, the crystallization conditions were preliminarily screened, which laid a foundation for the study of its structure and function.
【作者單位】： 吉林大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院;上海醫(yī)藥集團(tuán)股份有限公司中央研究院;
【分類(lèi)號(hào)】：R392-33

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本文編號(hào)：2237702