【摘要】：流行病學(xué)研究表明血漿高密度脂蛋白(HDL)及其主要蛋白成分—載脂蛋白A-Ⅰ(apoA-Ⅰ)是冠心病最為重要的保護(hù)因素之一。盤狀HDL或apoA-Ⅰ是體內(nèi)膽固醇逆向轉(zhuǎn)運(yùn)過程的關(guān)鍵因子。而游離型(lipid-free)或與少量脂質(zhì)結(jié)合(lipid-poor)形式的apoA-Ⅰ，是細(xì)胞膽固醇和磷脂最為有效的受體。成熟apoA-Ⅰ是由243個(gè)氨基酸殘基組成的單一多肽，多肽鏈內(nèi)含有8個(gè)串連重復(fù)排列片段，每一片段由22個(gè)氨基酸殘基組成，呈雙性α螺旋。ApoA-Ⅰ_(Milano)是apoA-Ⅰ的天然突變體，在其多肽鏈中apoA-Ⅰ 173位精氨酸被半胱氨酸取代，從而可通過鏈間二硫鍵形成同源二聚體(A-Ⅰ_M／A-Ⅰ_M)或與apoA-Ⅱ形成異源二聚體。臨床和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)均顯示該位點(diǎn)半胱氨酸突變后，能高度保護(hù)其攜帶者或?qū)嶒?yàn)動(dòng)物免于發(fā)生心血管疾病；而ApoA-Ⅰ_M這些不同尋常的表現(xiàn)也存在于apoA-Ⅰ的另一半胱氨酸突變體apoA-Ⅰ_(Paris)，，該突變體中第151位精氨酸被半胱氨酸取代。上述兩個(gè)半胱氨酸突變體分別發(fā)生于螺旋5和螺旋6兩性α螺旋親水性和疏水性界面上，突變點(diǎn)在多肽鏈上恰好相隔22個(gè)氨基酸殘基。 實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?本研究對(duì)野生型apoA-Ⅰ和分別發(fā)生在apoA-Ⅰ多肽鏈7個(gè)α螺旋片段上的半胱氨酸突變體二級(jí)結(jié)構(gòu)和功能進(jìn)行比較，以觀察α螺旋極性和非極性界面或其附近的半胱氨酸突變?nèi)绾斡绊慳poA-Ⅰ蛋白的結(jié)構(gòu)和功能；這些特定的半胱氨酸突變體的結(jié)構(gòu)和功能之間是否存在某些必然聯(lián)系。我們希望這些問題的解答能夠?qū)ξ覀兏钊�、更全面的認(rèn)識(shí)天然突變體apoA-Ⅰ_M心血管保護(hù)特性的實(shí)質(zhì)有所幫助。 實(shí)驗(yàn)方法： 通過DNA重組、位點(diǎn)誘變，分別將apoA-Ⅰ 7個(gè)串聯(lián)重復(fù)α-螺旋片段上相應(yīng)于apoA-Ⅰ_M突變位點(diǎn)的氨基酸誘變?yōu)榘腚装彼�，產(chǎn)生一系列apoA-Ⅰ半胱氨酸突變體：A-Ⅰ(S52C)、A-Ⅰ(N74C)、A-Ⅰ(K107C)、A-Ⅰ(G129C)、A-Ⅰ_M(R173C)、A-Ⅰ(K195C)及A-Ⅰ(S228C)，利用pET原核表達(dá)系統(tǒng)對(duì)野生型及突變的apoA-Ⅰ進(jìn)行蛋白表達(dá)，Ni~(2+)親和柱進(jìn)行目的蛋白純化，獲得多肽鏈C-末端帶有6個(gè)組氨酸標(biāo)簽(6×His tag)的高純度蛋白(純度＞90％)用于下面的結(jié)構(gòu)和功能實(shí)驗(yàn)。我們利
[Abstract]:Epidemiological studies show that plasma HDL (HDL) and its main protein component, apolipoprotein A- 鈪

本文編號(hào)：2221247