發(fā)布時(shí)間：2018-09-02 06:59

【摘要】：SHIV病毒艾滋病動(dòng)物模型是目前國外艾滋病模型研究的趨勢，被認(rèn)為是比現(xiàn)階段普遍應(yīng)用的SIV模型針對性更強(qiáng)、更有意義的動(dòng)物模型。為了盡早開展國內(nèi)此項(xiàng)研究，，尤其是選定毒力較強(qiáng)的SHIV毒株，成功建立SHIV感染動(dòng)物模型，在前期SIV／SAIDS模型研究的基礎(chǔ)上，本研究以SHIV-XJ02170病毒(以SIVmac239病毒基因組和C型HIV-1病毒的env基因?yàn)橹黧w構(gòu)建的一株SHIV病毒)及前病毒質(zhì)粒接種中國恒河猴，進(jìn)行了包括臨床表現(xiàn)、病毒學(xué)、免疫學(xué)等方面研究。為了更準(zhǔn)確定量測定實(shí)驗(yàn)恒河猴病毒感染狀態(tài)，建立了測定SIV／SHIV病毒RNA載量的SYBR Green Ⅰ熒光染料實(shí)時(shí)定量RT-PCR方法和測定SIV／SHIV前病毒DNA的SYBR Green Ⅰ實(shí)時(shí)定量PCR方法。同時(shí)為了進(jìn)一步增強(qiáng)SHIV-XJ02170病毒的毒力，對其進(jìn)行中國恒河猴體內(nèi)傳代，以期獲得一株高毒力、高致病性的SHIV病毒。 本研究共選用了13只中國恒河猴，實(shí)驗(yàn)前經(jīng)血清學(xué)和PCR證明無SIV，STLV-1，SRV／D和B病毒感染。實(shí)驗(yàn)在生物安全三級實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行。第一代實(shí)驗(yàn)猴共4只，分兩組。第一組2只經(jīng)肌肉注射SHIV-XJ02170前病毒質(zhì)粒DNA；第二組兩只靜脈注射SHIV-XJ02170病毒液。當(dāng)?shù)谝淮鷮?shí)驗(yàn)猴檢出病毒達(dá)高峰期后，取10mL感染猴的全血，抗凝后靜脈接種第二代4只實(shí)驗(yàn)猴。第二代實(shí)驗(yàn)猴檢出病毒后再將其全血靜脈接種第三代3只實(shí)驗(yàn)猴，連續(xù)傳至第4代2只猴。每代實(shí)驗(yàn)猴均定期采集肝素和EDTA抗凝血液標(biāo)本，分別進(jìn)行病毒分離、PCR方法檢測感染猴PBMC中前病毒DNA、RT-PCR方法檢測血漿病毒RNA、CD4~+／CD8~+、血漿P27抗原等指標(biāo)的測定，以監(jiān)測SHIV-XJ02170病毒在恒河猴體內(nèi)復(fù)制和傳代情況。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示原代SHIV-XJ02170病毒和前病毒質(zhì)粒均可感染中國恒河猴，但傳代的實(shí)驗(yàn)猴病毒檢出率降低，病毒血癥持續(xù)時(shí)間明顯縮短，且全部13只實(shí)驗(yàn)猴都未產(chǎn)生典型的艾滋病癥狀，只有二代猴A0408
[Abstract]:SHIV HIV / AIDS animal model is the trend of AIDS model research abroad. It is considered to be a more targeted and meaningful animal model than the SIV model which is widely used at present. In order to carry out this domestic study as soon as possible, especially to select the virulent SHIV strain, the animal model of SHIV infection was established successfully. Based on the previous study of SIV/SAIDS model, In this study, the Chinese rhesus monkey was inoculated with SHIV-XJ02170 virus (a SHIV virus constructed from the genome of SIVmac239 virus and the env gene of type C HIV-1 virus) and its provirus plasmid, including clinical manifestations, virology, immunology and so on. In order to determine the infection status of rhesus monkey virus more accurately, the SYBR Green 鈪

本文編號：2218620