【摘要】：目的建立新生SD大鼠神經(jīng)干細(xì)胞(NSCs)的分離培養(yǎng)、體外分化、鑒定及體外長期培養(yǎng)的方法,并探討血清濃度對NSCs分化的影響。方法取新生SD大鼠大腦組織,用無血清培養(yǎng)技術(shù)培養(yǎng)NSCs。采用免疫熒光技術(shù)對NSCs進(jìn)行鑒定,檢測其巢蛋白(Nestin)表達(dá)。用含有不同胎牛血清(FBS)濃度(2%、5%、10%)的DMEM/F-12培養(yǎng)基誘導(dǎo)NSCs分化,分別用神經(jīng)元特異性微管相關(guān)蛋白2(MAP-2)抗體、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞特異性膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)抗體行免疫熒光染色鑒定分化細(xì)胞。通過Western blot法檢測不同F(xiàn)BS濃度的分化條件下MAP-2與GFAP的表達(dá)情況。結(jié)果獲得大量未分化且懸浮生長的NSCs球,并能分化為神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞。隨著血清濃度的增加,各組MAP-2的表達(dá)逐漸增加(P0.05),GFAP的表達(dá)逐漸減少(P0.05)。結(jié)論應(yīng)用無血清培養(yǎng)技術(shù)可成功在體外培養(yǎng)出具有增殖、自我更新及多潛能分化能力的新生大鼠NSCs,可于含有不同F(xiàn)BS濃度(2%、5%、10%)的分化條件下進(jìn)一步分化為神經(jīng)元及神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞,含低濃度血清的條件培養(yǎng)基促進(jìn)NSCs向神經(jīng)元方向分化,而高濃度血清則有利于NSCs向神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞方向分化。
[Abstract]:Objective to establish a method for isolation, differentiation, identification and long-term culture of neural stem cells (NSCs) from neonatal SD rats, and to explore the effect of serum concentration on NSCs differentiation. Methods the brain tissue of newborn SD rats was taken and NSCs. was cultured by serum-free culture. NSCs was identified by immunofluorescence technique and its nestin (Nestin) expression was detected. The differentiation of NSCs was induced by DMEM/F-12 medium containing 10% fetal bovine serum (FBS). The differentiated cells were identified by immuno fluorescence staining with neuron specific microtubule-associated protein 2 (MAP-2) antibody and glial cell-specific glial fibrillary acidic protein (GFAP) antibody. The expression of MAP-2 and GFAP in different concentration of FBS was detected by Western blot method. Results A large number of undifferentiated and suspended NSCs spheres were obtained and differentiated into neurons and glial cells. With the increase of serum concentration, the expression of MAP-2 increased (P0.05) and the expression of GFAP decreased (P0.05). Conclusion using serum-free culture technique, neonatal rat NSCs, with proliferation, self-renewal and multipotential differentiation can be successfully cultured in vitro and further differentiated into neurons and glial cells under the conditions of different FBS concentration (22% and 10%). The conditioned medium containing low concentration of serum could promote the differentiation of NSCs into neurons, while high concentration of serum could promote the differentiation of NSCs into glial cells.
【作者單位】： 安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院骨科;安徽醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院組織學(xué)與胚胎學(xué)教研室 組織工程干細(xì)胞研究所;
【分類號】：R329

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2218207