【摘要】：人類腸道病毒(HEV)是小核糖核酸病毒科的一個屬,文獻(xiàn)報(bào)道的HEV已有91個型,分為脊髓灰質(zhì)炎病毒、柯薩奇A組、B組病毒、�？刹《竞托滦湍c道病毒5個組。人類腸道病毒感染大多表現(xiàn)為隱性感染或癥狀輕微,但也可以引起無菌性腦膜炎、弛緩性麻痹、急性心肌炎、手足口病等嚴(yán)重疾病。常規(guī)的HEV鑒定多采用病毒分離結(jié)合中和試驗(yàn)等血清學(xué)方法,由于HEV血清型繁多,血清學(xué)分型鑒定費(fèi)時(shí)費(fèi)力。本研究的目的在于建立人類腸道病毒分子生物學(xué)分型鑒定方法,用于臨床分離腸道病毒的分型鑒定。 根據(jù)已知各型別人類腸道病毒基因的核苷酸序列和文獻(xiàn)資料,分別合成1對HEV種屬特異性引物“EV1/EV2”和5對分型鑒定引物“P1/P2”、“P1/P3”、“P4/P7”、“P5/P7”和“P6/P7”,提取病毒RNA,采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)擴(kuò)增病毒cDNA,通過瓊脂糖凝膠電泳和核苷酸序列分析,建立了人類腸道病毒的分子生物學(xué)分型鑒定方法。采用該方法鑒定了18株疑似HEV毒株,并與血清中和試驗(yàn)相互驗(yàn)證。結(jié)果表明,經(jīng)種屬特異性引物鑒定,其中17株為人類腸道病毒;采用型特異性引物進(jìn)行分型鑒定,其中4株為科薩奇病毒A24型,3株為科薩奇病毒B3型;科薩奇病毒B2、A9、A15型、埃可病毒3、6、7、9、11、14、33型和鼻病毒9型各1株,微量中和試驗(yàn)結(jié)果與分子生物學(xué)方法分型結(jié)果完全符合。 本實(shí)驗(yàn)組合運(yùn)用了上述6對HEV鑒定和分型引物,對全部引物的PCR擴(kuò)增體系和擴(kuò)增條件進(jìn)行了統(tǒng)一,可以顯著節(jié)約病原學(xué)檢出時(shí)間,同時(shí)可以確定流行株可能發(fā)生的基因變異情況,與傳統(tǒng)的病毒分離和血清學(xué)鑒定分型方法相比具有特異性強(qiáng)、敏感性高、快速簡便等優(yōu)點(diǎn),可以直接鑒定并分型診斷人類腸道病毒感染,適用于人類腸道病毒感染的實(shí)驗(yàn)室診斷和流行病學(xué)研究。
[Abstract]:Human enterovirus (HEV) is a genus of small ribonucleic acid viridae. There are 91 types of HEV reported in the literature, which are divided into five groups: poliovirus, Coxsackie A group B virus, Echo virus and new enterovirus group. The infection of human enterovirus is mostly manifested as recessive infection or mild symptoms, but it can also cause aseptic meningitis, flaccid paralysis, acute myocarditis, hand, foot and mouth disease and other serious diseases. Serological methods such as virus isolation combined with neutralization test and so on are used in routine HEV identification. Because of the variety of serotypes of HEV serological typing is time-consuming and laborious. The purpose of this study was to establish a molecular biological typing method for the identification of human enterovirus. According to the nucleotide sequence and literature data of other enterovirus-like genes, one pair of HEV species-specific primers "EV1/EV2" and five pairs of primers "P1/P2", "P1/P3", "P4/P7", "P5/P7" and "P6/P7" were synthesized respectively. Virus RNA, was extracted by reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) amplification of virus cDNA, by agarose gel electrophoresis and nucleotide sequence analysis the molecular biological typing method of human enterovirus was established. Eighteen suspected HEV strains were identified by this method and verified with serum neutralization test. The results showed that 17 of them were human enterovirus by species-specific primer identification, 4 of them were identified by type-specific primers, 4 of them were type B3 of Coxsackievirus A24 and 4 of them were type B3 of Coxsackievirus B _ (2) A _ (9) A _ (15). The results of microneutralization test were in good agreement with the results of molecular biological typing. In this experiment, six pairs of primers for HEV identification and typing were used to unify the PCR amplification system and amplification conditions of all primers, which could significantly save the time of pathogen detection. At the same time, the possible genetic variation of the epidemic strain can be determined. Compared with the traditional virus isolation and serological identification and typing method, it has the advantages of high specificity, high sensitivity, rapid and simple, and so on. Human enterovirus infection can be directly identified and typed. It is suitable for laboratory diagnosis and epidemiological study of human enterovirus infection.
【學(xué)位授予單位】：中國人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類號】：R446.9;R373.21

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本文編號：2207685