【摘要】： 背景與目的既往研究認(rèn)為,心肌壞死只能通過形成疤痕組織進(jìn)行修復(fù),使用藥物可以通過延緩心肌重構(gòu)來降低心衰的發(fā)生和臨床死亡率。近年來,人們一直在尋求用一種細(xì)胞取代壞死的心肌細(xì)胞以期維持正常的心臟功能,而干細(xì)胞移植的研究進(jìn)展為心肌壞死患者的治療帶來了新的希望。 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(Mesenchymal stem cells ,MSCs)是一種具有自我復(fù)制和增殖潛能的細(xì)胞,并可在適當(dāng)?shù)沫h(huán)境條件下分化為具有不同生理功能的細(xì)胞,且不會涉及倫理問題,是目前認(rèn)為最有希望成為壞死心肌細(xì)胞替代治療的干細(xì)胞。1999年Makino等將MSCs連續(xù)傳代4個月以上,得到永生細(xì)胞(immortalized cells),其在5-氮胞苷(5-aza)的作用下誘導(dǎo)分化,篩選出部分細(xì)胞類似胎兒的心肌細(xì)胞,這為MSCs的心臟細(xì)胞移植提供了理論基礎(chǔ)。近年來,國內(nèi)外雖對MSCs在各種條件下誘導(dǎo)分化為心肌樣細(xì)胞進(jìn)行了諸多研究,但對誘導(dǎo)后MSCs的鑒定主要集中在形態(tài)學(xué)和免疫組化方面,有關(guān)MSCs體外誘導(dǎo)分化心肌樣細(xì)胞的電生理特性研究極少,而誘導(dǎo)后的心肌樣細(xì)胞是否具有與心肌細(xì)胞相似的電生理特性,直接關(guān)系到細(xì)胞移植到體內(nèi)后是否能與心肌細(xì)胞在功能上融合,具備可興奮性及傳導(dǎo)性特征。本實(shí)驗(yàn)擬在體外將大鼠MSCs經(jīng)5-aza誘導(dǎo)心肌化,采用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù),對細(xì)胞膜電流進(jìn)行研究。 方法 1.取健康SD大鼠骨髓,經(jīng)密度梯度離心和貼壁培養(yǎng)獲得MSCs,傳兩代后,以10μmol/L的5-aza孵育誘導(dǎo)24小時。培養(yǎng)4周,用免疫細(xì)胞化學(xué)染色方法鑒定心肌樣細(xì)胞;并與未經(jīng)誘導(dǎo)分化的MSCs進(jìn)行比較。 2.取誘導(dǎo)后4周的MSCs為實(shí)驗(yàn)組,原代培養(yǎng)一周的未誘導(dǎo)MSCs和急性分離的大鼠心肌細(xì)胞為對照組,采用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)對各組細(xì)胞進(jìn)行膜電位檢測。使用各種離子通道阻斷劑對記錄到的各種膜電流進(jìn)行鑒定。并對各組細(xì)胞記錄到的膜電流進(jìn)行比較和分析。 結(jié)果 1.免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示,經(jīng)5-aza誘導(dǎo)后約40-50%的MSCs表達(dá)心肌特異
[Abstract]:Background & AIM previous studies suggest that myocardial necrosis can only be repaired by scar formation and that drug use can reduce the incidence of heart failure and clinical mortality by delaying myocardial remodeling. In recent years, people have been seeking to replace the necrotic cardiomyocytes with a kind of cells in order to maintain normal cardiac function, and the research progress of stem cell transplantation has brought new hope for the treatment of myocardial necrosis patients. Bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs) are self-replicating and proliferative cells that can differentiate into cells with different physiological functions under appropriate conditions, and have no ethical implications. In 1999, Makino et al subcultured MSCs for more than 4 months, and obtained immortalized cells (immortalized cells), which induced differentiation under the action of 5-azacytidine (5-aza). Some fetal cardiomyocytes were screened, which provides a theoretical basis for cardiac cell transplantation of MSCs. In recent years, although many studies have been carried out on the differentiation of MSCs into cardiomyoid cells under various conditions, the identification of induced MSCs is mainly focused on morphology and immunohistochemistry. There are few studies on the electrophysiological properties of cardiomyoid cells induced by MSCs in vitro, and whether the induced cardiomyocytes have similar electrophysiological properties to cardiomyocytes. It is directly related to whether the cells can fuse with cardiomyocytes after transplantation in vivo and possess the characteristics of excitability and conductivity. In this experiment, rat MSCs was induced by 5-aza in vitro and the cell membrane current was studied by whole-cell patch clamp technique. Method 1. The bone marrow of healthy SD rats was obtained by density gradient centrifugation and adherent culture. After two generations, MSCs, was incubated with 10 渭 mol/L 5-aza for 24 hours. Cultured for 4 weeks, cardiomyoid cells were identified by immunocytochemical staining and compared with undifferentiated MSCs. 2. Four weeks after induction, MSCs was used as experimental group, uninduced MSCs and acute isolated rat cardiomyocytes were cultured for one week as control group. The membrane potential of each group was detected by whole-cell patch clamp technique. Various ion channel blockers were used to identify the recorded membrane currents. The membrane currents recorded in each group were compared and analyzed. Result 1. Immunohistochemical staining showed that about 40-50% of MSCs expressed myocardial specificity after induction by 5-aza.
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類號】：R329.2

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本文編號：2204550