【摘要】：目的:利用不加任何誘導劑的懸浮培養(yǎng)法,體外誘導人胚胎干細胞分化為心肌細胞并檢測其分化效率。方法:人胚胎干細胞克隆用200U/mL膠原酶Ⅳ,370C處理10min后,挑起克隆碎片轉移到低黏附性培養(yǎng)皿中懸浮培養(yǎng)以形成EB(擬胚體),4d后將EB轉移到基質膠處理過的6孔板中貼壁培養(yǎng)(1-3EBs/cm2),顯微鏡下觀察記錄出現跳動心肌細胞的時間和跳動頻率,并計算跳動克隆百分比,24孔板一組,共記錄4組96孔;免疫熒光染色檢測心肌細胞特異標志物cTnT;膜片鉗實驗檢測心肌細胞自發(fā)性動作電位;跳動心肌細胞經過24h缺氧刺激后,用凋亡試劑盒檢測心肌細胞凋亡比例。結果:在懸浮培養(yǎng)14d左右開始出現大量的自發(fā)跳動心肌細胞,分化出現自發(fā)跳動心肌細胞的平均時間(13.9±0.9)d,百分比為20.8%,平均跳動頻率為(63.8±5.6)次/min;跳動心肌細胞cTnT染色陽性;跳動心肌細胞檢測到自發(fā)性動作電位;跳動心肌細胞缺氧24h的凋亡比例為(8.1±0.4)%。結論:不加誘導劑的懸浮培養(yǎng)可以誘導人胚胎干細胞分化為心肌細胞,分化效率達到20.8%,分化時間14d左右。為進一步的干細胞移植治療動物心肌梗死模型提供種子細胞。
[Abstract]:Aim: to induce human embryonic stem cells to differentiate into cardiomyocytes in vitro by suspension culture without any inducer. Methods: human embryonic stem cell clones were treated with 200U/mL collagenase 鈪，

本文編號：2204224