發(fā)布時(shí)間：2018-08-19 15:30

【摘要】：目的：在惡性腫瘤特異性診斷治療中，廣譜癌基因以其潛在的應(yīng)用價(jià)值成已成為應(yīng)用研究熱點(diǎn)。在診斷應(yīng)用中，利用單克隆抗體檢測(cè)腫瘤特異抗原成為臨床診斷的重要組成部分，同時(shí)應(yīng)用腫瘤特異性抗原激活抗原提呈細(xì)胞進(jìn)行免疫治療，也正在成為重要的腫瘤輔助治療手段，腫瘤抗原已經(jīng)成為目前的研究熱點(diǎn)。NY-ESO-1抗原是近年發(fā)現(xiàn)的一種腫瘤特異性抗原，屬于癌癥睪丸抗原(cancer-testis antigen，CTA)家族。NY-ESO-1，在正常組織只表達(dá)于睪丸、胎盤(這些組織由于不表達(dá)MHC-Ⅰ類分子，不能成為免疫攻擊的目標(biāo)，屬于免疫特權(quán)部位能得以免疫豁免)，在腫瘤組織中NY-ESO-1抗原廣泛表達(dá)。我們通過(guò)基因克隆制備人NY-ESO-1全基因，并將其構(gòu)建于表達(dá)載體PGEX-4T-2中，得到重組表達(dá)載體PGEX-4T-2／NY-ESO-1，將PGEX-4T-2／NY-ESO-1轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21后進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)，，得到的融合蛋白經(jīng)純化后進(jìn)行動(dòng)物免疫，制備多克隆抗體，通過(guò)建立NY-ESO-1單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞系，制備抗NY-ESO-1單克隆抗體，確定其免疫學(xué)特性后，用于檢測(cè)NY-ESO-1在乳癌中的表達(dá)，判斷NY-ESO-1與乳癌的發(fā)生發(fā)展之間的關(guān)系。 方法：將人黑色素瘤NY-ESO-1重組表達(dá)載體PGEX-4T-2／NY-ESO-1(本室保存)轉(zhuǎn)化的BL21大腸桿菌，通過(guò)IPTG誘導(dǎo)表達(dá)后，獲得可溶性融合蛋白。融合蛋白經(jīng)谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶親和層析柱純化，免疫Balb／c小鼠。用傳統(tǒng)方法進(jìn)行細(xì)胞融合后，采用本室改良的細(xì)胞篩選方法制備了鼠抗人單克隆抗體，并對(duì)得到的單克隆抗體進(jìn)行了特異性、亞類和亞型等的鑒定。對(duì)乳癌組織進(jìn)行免疫組化，檢測(cè)NY-ESO-1的蛋白表達(dá)并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。 結(jié)果：成功誘導(dǎo)表達(dá)PGEX-4T-2／NY-ESO-1轉(zhuǎn)化的BL21大腸桿菌，得到純度＞90％的GST-NY-ESO-1蛋白，進(jìn)行牛凝血酶切割后，得到純化的NY-ESO-1蛋白。成功免疫Balb／c小鼠，得到血清效價(jià)1：20000的小鼠。進(jìn)行傳統(tǒng)細(xì)胞融合后，進(jìn)行ELISA篩選，篩選
[Abstract]:Objective: in the specific diagnosis and treatment of malignant tumor, broad spectrum oncogene has become a hot research field for its potential application value. In diagnostic application, the detection of tumor specific antigen by monoclonal antibody becomes an important part of clinical diagnosis, and the tumor specific antigen activated antigen presenting cell is used for immunotherapy. Tumor antigen is becoming an important adjuvant therapy for cancer. Tumor antigen has become a hot research topic. NY-ESO-1 antigen is a kind of tumor-specific antigen discovered in recent years. It belongs to the cancer-testis antigens family. NY-ESO-1 is expressed only in testis in normal tissues. Placenta (these tissues can not be the target of immune attack because they do not express MHC- 鈪

本文編號(hào)：2192081