【摘要】： 研究背景:外周組織損傷所致的炎癥既伴隨有疼痛的產(chǎn)生(持續(xù)性自發(fā)痛、痛敏及觸痛等)同時(shí)又有明顯的紅、腫、熱等炎癥反應(yīng)。我們以往的研究發(fā)現(xiàn),大鼠后足底中心皮下注射蜜蜂毒溶液不僅能產(chǎn)生明顯的持續(xù)自發(fā)痛反應(yīng)、熱及機(jī)械性痛敏反應(yīng)[1-5],而且在注射部位有明顯的紅腫等炎癥發(fā)應(yīng)[1-5]。已有大量的研究表明MAP(mitogen-activated protein kinase)與疼痛及炎癥的發(fā)生有關(guān),且ERK1/2和P38在組織和神經(jīng)損傷誘致的疼痛和熱及機(jī)械痛敏中的作用各不相同。 目的:通過(guò)觀察周圍局部預(yù)先給予ERK1/2、P38和MEK的抑制劑對(duì)皮下注射蜜蜂毒誘致的持續(xù)自發(fā)疼痛反應(yīng)、機(jī)械性痛敏以及炎癥反應(yīng),用以探討MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑在蜜蜂毒誘致的炎癥與疼痛中的作用機(jī)制。這些研究可能為臨床炎性疼痛治療提供新的理論資料和思路。 材料和方法:應(yīng)用蜜蜂毒(bee venom, BV)作為化學(xué)致痛劑皮下注射模型來(lái)研究MAPK在大鼠的自發(fā)痛反應(yīng)、機(jī)械痛敏和炎癥反應(yīng)中的作用。實(shí)驗(yàn)采用雄性SD大鼠,體重250～300克。分別預(yù)先10分鐘給予大鼠一側(cè)后肢足底皮下注射不同劑量的ERK1/2抑制劑PD98059,P38抑制劑SB202190和MEK1/2抑制劑U0126,其后注射側(cè)后肢足底皮下注射蜜蜂毒(0.2mg/50　l)。而對(duì)照組皆注射PD98059,SB202190和U0126的溶媒(50μl/只,DMSO:PBS=3:7)。同時(shí)為了排除藥物的全身效應(yīng),分別提前10分鐘在蜜蜂毒注射的對(duì)側(cè)皮下注射相應(yīng)的較高劑量的PD98059(100ug),SB202190(100ug/50μl)和U0126(10ug/50μl)。觀察大鼠在蜜蜂毒注射后1個(gè)小時(shí)內(nèi)自發(fā)痛行為(縮足反射),每5分鐘為一個(gè)計(jì)時(shí)點(diǎn)。蜜蜂毒注射前及注射后2小時(shí)用von-Frey機(jī)械刺激器纖維檢測(cè)注射側(cè)鼠爪機(jī)械刺激反應(yīng)閾值( paw withdrawal mechanical threshold ,PWMT)以及應(yīng)用YLS-7A足趾容積測(cè)量?jī)x測(cè)量注射前及蜜蜂毒注射后3小時(shí)注射側(cè)鼠爪的體積。 結(jié)果: (1)對(duì)自發(fā)痛的影響:同側(cè)及對(duì)側(cè)SB202190處理組:對(duì)蜜蜂毒誘致的自發(fā)縮足反射無(wú)任何影響;同側(cè)PD98059處理組:對(duì)蜜蜂毒誘致的自發(fā)縮足反射有明顯的抑制作用,且在后期(26-60 min)更加明顯,無(wú)明顯劑量依賴性,對(duì)側(cè)PD98059處理組:對(duì)蜜蜂毒誘致的自發(fā)縮足反射無(wú)影響;同側(cè)U0126處理組:在早期及晚期低劑量的U0126對(duì)自發(fā)縮足反射皆有易化作用,中等劑量1ug對(duì)自發(fā)縮足反射無(wú)影響,高劑量10ug對(duì)自發(fā)縮足反射在早期無(wú)影響,在晚期有明顯抑制作用,對(duì)側(cè)U0126處理組:對(duì)蜜蜂毒誘致的自發(fā)縮足反射無(wú)影響。 (2)對(duì)痛敏的影響:同側(cè)及對(duì)側(cè)PD98059處理組:對(duì)蜜蜂毒誘致的機(jī)械性刺激閾值的下降則無(wú)任何影響;同側(cè)SB202190處理組:蜜蜂毒誘致的機(jī)械性刺激閾值的下降發(fā)生翻轉(zhuǎn),各個(gè)劑量之間無(wú)明顯差異即無(wú)明顯劑量依賴,而對(duì)側(cè)SB202190處理對(duì)蜜蜂毒誘致的機(jī)械性刺激閾值的下降則無(wú)任何影響;同側(cè)及對(duì)側(cè)U0126處理對(duì)蜜蜂毒誘致的機(jī)械性刺激閾值的下降無(wú)任何影響。 (3)對(duì)炎癥的影響:同側(cè)或?qū)?cè)PD98059處理組:對(duì)由蜜蜂毒引起的鼠爪體積增加無(wú)明顯影響;同側(cè)SB202190處理組:高劑量(100ug)時(shí)能夠明顯抑制蜜蜂毒注射所引起的鼠爪體積的增加,而低劑量(1ug和10ug)及對(duì)側(cè)SB202190處理組:對(duì)由蜜蜂毒引起的鼠爪體積增加無(wú)明顯影響;同側(cè)或?qū)?cè)U0126處理組:對(duì)由蜜蜂毒引起的鼠爪體積增加無(wú)明顯影響。 結(jié)論: (1)MEK1/2—MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑介導(dǎo)蜜蜂毒誘致的持續(xù)自發(fā)縮足行為,且其表達(dá)水平的高低對(duì)蜜蜂毒誘致的持續(xù)自發(fā)縮足行為有關(guān):一定水平的MEK1/2表達(dá)可能抑制而不是易化蜜蜂毒誘致的自發(fā)痛行為,而高水平的MEK1/2表達(dá)可能促進(jìn)蜜蜂毒誘致的自發(fā)痛行為。P38—MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑不參與介導(dǎo)蜜蜂毒誘致的持續(xù)自發(fā)痛行為。ERK1/2—MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑參與蜜蜂毒誘致的持續(xù)自發(fā)縮足反射。 (2)外周P38—MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑參與蜜蜂毒誘致的機(jī)械性痛敏,但無(wú)劑量依賴性。MEK1/2—ERK1/2 MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑不參與蜜蜂毒誘導(dǎo)的機(jī)械性痛敏的發(fā)生。 (3) ERK-MEK MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑不參與蜜蜂毒誘致的炎癥反應(yīng),而P38參與蜜蜂毒誘致的炎癥反應(yīng),并且有劑量依賴性。
[Abstract]:BACKGROUND: Inflammation caused by peripheral tissue injury is accompanied by pain (persistent spontaneous pain, hyperalgesia, tenderness, etc.) and obvious inflammation such as red, swollen, and hot. Our previous studies have shown that subcutaneous injection of bee venom solution into the center of the hind plantar of rats can not only produce significant persistent spontaneous pain, but also produce significant thermal and mechanical effects. A large number of studies have shown that MAP (mitogen-activated protein kinase) is associated with pain and inflammation, and ERK1/2 and P38 play different roles in tissue and nerve injury-induced pain, heat and mechanical hyperalgesia.
OBJECTIVE: To investigate the mechanism of MAPK signaling pathway in inflammation and pain induced by honeybee venom by observing the effects of ERK1/2, P38 and MEK inhibitors on spontaneous pain, mechanical hyperalgesia and inflammation induced by subcutaneous injection of honeybee venom. To provide new theoretical information and ideas.
Materials and Methods: Bee venom (BV) was used as a subcutaneous injection model to study the effects of MAPK on spontaneous pain, mechanical pain and inflammation in rats. Male SD rats weighing 250-300 grams were given different doses of ERK1/2 subcutaneously for 10 minutes. PD98059, P38 inhibitor SB202190 and MEK1/2 inhibitor U0126 were injected subcutaneously into the plantar of hind limbs (0.2mg/50l). The control group was injected with PD98059, SB202190 and U0126 (50ml/rat, DMSO:PBS=3:7). In order to exclude the systemic effect of the drug, the contralateral subcutaneous injection was performed 10 minutes earlier. Higher doses of PD98059 (100ug), SB202190 (100ug/50ugl) and U0126 (10ug/50ugl) were used to observe the spontaneous pain behavior (foot retraction) in rats within 1 hour after bee venom injection, and the time point was 5 minutes. The mechanical stimulator fibers were used to detect the mechanical stimulus response threshold of rats'paws before and 2 hours after bee venom injection. Paw withdrawal mechanical threshold (PWMT) and YLS-7A toe volume meter were used to measure the paw volume before and 3 hours after bee venom injection.
Result:
(1) Effect on spontaneous pain: ipsilateral and contralateral SB202190 treatment group: no effect on the spontaneous systolic reflex induced by honey bee venom; ipsilateral PD98059 treatment group: the spontaneous systolic reflex induced by honey bee venom was significantly inhibited, and in the later period (26-60 minutes) more obvious, no significant dose-dependent, contralateral PD98059 treatment group: on the venom induced by honey bee venom Ipsilateral U0126 treatment group: low dose U0126 had facilitation effect on spontaneous shrinkage reflex in early and late stage, medium dose 1ug had no effect on spontaneous shrinkage reflex, high dose 10ug had no effect on spontaneous shrinkage reflex in early stage, but had obvious inhibition effect in late stage. The spontaneous retraction reflex had no effect.
(2) The effect on pain sensitivity: ipsilateral and contralateral PD98059 treatment group: no effect on the decrease of mechanical stimulation threshold induced by bee venom; ipsilateral SB202190 treatment group: the decline of mechanical stimulation threshold induced by bee venom reversed, and there was no significant dose dependence between different doses, while the ipsilateral SB202190 treatment on bee. The decrease of mechanical stimulation threshold induced by bee venom had no effect, and the decrease of mechanical stimulation threshold induced by bee venom was not affected by ipsilateral and contralateral U0126 treatments.
(3) Inflammation: ipsilateral or contralateral PD98059 treatment group: no significant effect on the increase of paw volume caused by bee venom; ipsilateral SB202190 treatment group: high dose (100ug) can significantly inhibit the increase of paw volume caused by bee venom injection, while low dose (1ug and 10ug) and contralateral SB202190 treatment group: on the increase of paw volume caused by bee venom The same side or contralateral U0126 treatment group had no significant effect on the increase of rat paw volume caused by bee venom.
Conclusion:
(1) MEK1/2-MAPK signal transduction pathway mediates persistent spontaneous foot shrinkage induced by honeybee venom, and its expression level is related to persistent spontaneous foot shrinkage induced by honeybee venom: a certain level of MEK1/2 expression may inhibit but not predispose spontaneous pain induced by honeybee venom, while high level of MEK1/2 expression may promote honeybee venom. P38-MAPK signal transduction pathway was not involved in the mediation of persistent spontaneous pain induced by bee venom. ERK1/2-MAPK signal transduction pathway was involved in the persistent spontaneous contraction reflex induced by bee venom.
(2) Peripheral P38-MAPK signal transduction pathway is involved in mechanical hyperalgesia induced by bee venom, but not dose-dependent. MEK1/2-ERK1/2 MAPK signal transduction pathway is not involved in mechanical hyperalgesia induced by bee venom.
(3) ERK-MEK MAPK signaling pathway did not participate in the inflammation induced by bee venom, but P38 was involved in the inflammation induced by bee venom in a dose-dependent manner.
【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號(hào)】：R363

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本文編號(hào)：2179277