【摘要】： 成體干細(xì)胞跨越分化為其它組織類型細(xì)胞的研究已成為當(dāng)前干細(xì)胞研究的新熱點(diǎn)，，它不僅對探索細(xì)胞分化發(fā)育的機(jī)制具有重要的理論意義，而且為臨床細(xì)胞移植治療開辟了新的途徑。作為最重要的成體干細(xì)胞之一，骨髓來源的干細(xì)胞分化研究倍受重視，以往的研究表明，它們具有較強(qiáng)的可塑性，能夠分化成神經(jīng)細(xì)胞、心肌細(xì)胞、骨骼肌細(xì)胞、上皮細(xì)胞和胰島細(xì)胞。近年來，Petersen等進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)，在CCl_4致肝臟損傷的微環(huán)境下，移植的骨髓細(xì)胞能夠分化成為肝卵圓細(xì)胞甚至成為成熟的肝細(xì)胞和膽管細(xì)胞。然而，由于體內(nèi)研究背景的復(fù)雜性，目前這種跨越分化的機(jī)制尚不清楚，這就需要建立相關(guān)的體外分化技術(shù)進(jìn)行研究。另外，骨髓中存在能分化為肝細(xì)胞的干細(xì)胞雖已成定論，但究竟是其中的幾個(gè)亞型還是所有的骨髓細(xì)胞均可分化為肝細(xì)胞仍值得研究。 本文將注射過CCl_4的小鼠肝臟進(jìn)行培養(yǎng)，收集損傷肝臟條件培養(yǎng)液，添加到培養(yǎng)液中以模擬體內(nèi)肝損傷微環(huán)境，誘導(dǎo)間充質(zhì)干細(xì)胞的分化。利用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)和免疫熒光反應(yīng)檢測各組細(xì)胞中甲胎蛋白(AFP)、細(xì)胞角蛋白18(CK18)、酪胺酸胺基轉(zhuǎn)移酶(TAT)和白蛋白(ALB)基因的表達(dá)，并利用高碘酸希夫反應(yīng)檢測細(xì)胞糖原合成。結(jié)果顯示損傷肝臟條件培養(yǎng)液可以成功誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外分化成肝細(xì)胞。從而為骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞跨越分化為肝細(xì)胞的機(jī)制研究打下基礎(chǔ)，同時(shí)也為體外利用骨髓細(xì)胞分化為肝細(xì)胞的相關(guān)臨床應(yīng)用研究，建立新的技術(shù)方法。
[Abstract]:The study of adult stem cells crossing into other types of cells has become a new focus of stem cell research. It is not only of great theoretical significance to explore the mechanism of cell differentiation and development. It also opens up a new way for clinical cell transplantation therapy. As one of the most important adult stem cells, stem cells derived from bone marrow have attracted much attention. Previous studies have shown that they can differentiate into nerve cells, cardiomyocytes and skeletal muscle cells. Epithelial cells and islet cells. In recent years, Petersen et al further found that in the microenvironment of liver injury induced by CCl_4, transplanted bone marrow cells can differentiate into hepatic oval cells and even become mature hepatocytes and bile duct cells. However, due to the complexity of in vivo research background, the mechanism of in vitro differentiation is not clear, which requires the establishment of in vitro differentiation technology. In addition, although the existence of stem cells that can differentiate into hepatocytes in bone marrow has been decided, it is still worth studying whether some of these subtypes or all bone marrow cells can differentiate into hepatocytes. In this paper, the liver of mice injected with CCl_4 was cultured, and the conditioned medium of liver injury was collected and added to the medium to simulate the microenvironment of liver injury in vivo and induce the differentiation of mesenchymal stem cells. Reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR) and immunofluorescence reaction were used to detect the expression of keratin 18 (CK18), tyramidine aminotransferase (TAT) and albumin (ALB) gene in (AFP), cells. The results showed that the liver injury conditioned medium could induce the differentiation of bone marrow mesenchymal stem cells into hepatocytes in vitro. It will lay a foundation for the study of the mechanism of bone marrow mesenchymal stem cells to differentiate into hepatocytes, at the same time, it can also be used to study the clinical application of bone marrow mesenchymal stem cells differentiation into hepatocytes in vitro, and establish a new technique and method.
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類號(hào)】：R329

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本文編號(hào)：2174189