【摘要】： 【目的】從細(xì)胞水平探討胸腺五肽延緩衰老的作用和初步機(jī)制�！痉椒ā渴紫葘π∈笃つw成纖維細(xì)胞培養(yǎng)方法進(jìn)行研究,然后通過臺盼藍(lán)染色法檢測細(xì)胞活力、細(xì)胞生長曲線測定細(xì)胞增殖能力、HE染色法測定細(xì)胞形態(tài)、染色體分析鑒定其鼠源性、免疫組化染色對成纖維細(xì)胞進(jìn)行特異性鑒定,最后以小鼠皮膚成纖維細(xì)胞作為給藥載體,以細(xì)胞的增殖、傳代數(shù)、存活天數(shù)、細(xì)胞內(nèi)超氧化岐化酶(SOD酶)活力、丙二醛(MDA)含量研究胸腺五肽的抗衰老效應(yīng)�！窘Y(jié)果】在原代小鼠皮膚成纖維細(xì)胞培養(yǎng)上,得出一種較常規(guī)做法更為快捷、有效的胰蛋白酶消化法,和有利于細(xì)胞純化、生長、傳代、凍存的方法,為后續(xù)細(xì)胞實驗奠定基礎(chǔ)。通過臺盼藍(lán)染色法檢測細(xì)胞活力,顯示原代細(xì)胞存活率大于65%、傳代細(xì)胞存活率大于95%;顯示其細(xì)胞增殖能力符合一般細(xì)胞生長趨勢,生長狀態(tài)穩(wěn)定;細(xì)胞形態(tài)測定表明所培養(yǎng)細(xì)胞為典型成纖維細(xì)胞結(jié)構(gòu);染色體核型為二倍體n=40,確定了細(xì)胞的鼠源性;波形蛋白免疫組化染色成陽性說明其為成纖維細(xì)胞。與陰性對照組比較的結(jié)果表明,胸腺五肽能明顯促進(jìn)細(xì)胞的增殖(P0.001),增加細(xì)胞傳代數(shù)(兩代),增加細(xì)胞壽命(細(xì)胞存活時間從13天延長到了36天),并能促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)總SOD酶活力(P0.001),減少MDA的產(chǎn)生(P0.001)�！窘Y(jié)論】胸腺五肽可以促進(jìn)小鼠皮膚成纖維細(xì)胞增殖,增加其傳代數(shù),延長其存活時間,并提高細(xì)胞內(nèi)SOD酶活性,減少MDA含量,因此胸腺五肽具有抗衰老作用,同時小鼠皮膚成纖維細(xì)胞模型有可能成為一種高效率的抗衰老細(xì)胞模型。
[Abstract]:[objective] to investigate the effect and mechanism of thymopentapine on delaying senescence from cell level. [methods] the culture method of mouse skin fibroblasts was studied firstly, and then the viability of mouse skin fibroblasts was detected by trypan blue staining. Cell growth curve and HE staining were used to determine the cell morphology, the mouse origin was identified by chromosome analysis, and the fibroblasts were identified by immunohistochemical staining. Finally, mouse skin fibroblasts were used as drug delivery carriers. The antiaging effects of thymosin on primary mouse skin fibroblasts were studied by cell proliferation, transmission algebra, survival days, intracellular superoxide dismutase (SOD) activity and malondialdehyde (MDA) content. A method of trypsin digestion, which is faster and more effective than the conventional method, is obtained, which is beneficial to cell purification, growth, passage and cryopreservation, and lays a foundation for subsequent cell experiments. The viability of the cells was detected by trypan blue staining, which showed that the survival rate of the primary cells was greater than 65 and the survival rate of the passage cells was greater than 95%, which showed that the proliferation ability of the cells was consistent with the general cell growth trend and the growth state was stable. The morphological analysis showed that the cultured cells were typical fibroblast structure, the chromosome karyotype was diploid nong40, which confirmed the murine origin of the cells, and the positive staining of vimentin showed that the cells were fibroblasts. Compared with the negative control group, the results showed that, Thymopeptide could significantly promote cell proliferation (P0.001), increase cell transmission algebra (two generations), increase cell life (cell survival time from 13 days to 36 days), promote the total intracellular SOD enzyme activity (P0.001), and reduce the production of MDA (P0.001). [ Conclusion Thymosin can promote the proliferation of mouse skin fibroblasts. The thymic pentapeptide has anti-aging effect because it increases its transmission algebra, prolongs its survival time, increases the activity of SOD enzyme in cells and reduces the content of MDA. At the same time, the mouse skin fibroblast model may become a high-efficiency anti-aging cell model.
【學(xué)位授予單位】：天津大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號】：R392

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本文編號：2166855