【摘要】：研究背景： 艱難梭菌(Clostridium difficile)是西方工業(yè)化國家醫(yī)院內(nèi)感染的重要致病菌之一。臨床上約10％～20％的抗生素相關(guān)性腹瀉、75％抗生素相關(guān)性腸炎和近100％的偽膜性腸炎與此菌有關(guān)，統(tǒng)稱為艱難梭菌相關(guān)性疾病(Clostridium difficile associated diseases，CDAD)，每年造成數(shù)十億美元的經(jīng)濟損失。隨著我國工業(yè)的進一步發(fā)展以及人們對抗生素的使用日益普遍，其發(fā)病率有增加的趨勢。CDAD主要發(fā)生于長期服用抗生素者，也可發(fā)生于其他影響腸道正常菌群，降低抵抗艱難梭菌定殖的情形，如用抗腫瘤藥物、長期住院、免疫缺陷等，特別是那些有免疫功能降低者和／或老年人。CDAD臨床表現(xiàn)復(fù)雜多樣，從無癥狀攜帶者到爆發(fā)性結(jié)腸炎。重癥患者預(yù)后差，死亡率高達40％。甲硝唑和萬古霉素是治療該病的主要藥物，，但近年來，國內(nèi)外均出現(xiàn)同時耐甲硝唑、萬古霉素的艱難梭菌，給艱難梭菌的治療增加了困難，因此進行免疫防治研究十分重要。 艱難梭菌疫苗的研究目前已取得了很大進展，并出現(xiàn)了各種類型的疫苗，但由于種種原因，限制了其應(yīng)用。乳酸鏈球菌(Streptococcus lactis；Lactococcus lactis，以下簡稱乳鏈菌)是一種對人體無害，較為安全的食品工業(yè)菌，近年來乳鏈菌因不產(chǎn)生內(nèi)毒素，及產(chǎn)生的蛋白酶遠少于大腸桿菌等優(yōu)點而被大量用于表達多種生物多肽或蛋白，及口服疫苗的研究工作，并且被證實是安全有效的，這一方法為口服疫苗的研制開辟了一個全新的領(lǐng)域。目前國內(nèi)外均未見艱難梭菌重組乳鏈菌口服活菌疫苗的報道。 目的及意義： 由于乳鏈菌表達載體尚未商品化，無法通過購買或捐贈獲得。因而我們參照一些成熟的乳鏈菌表達系統(tǒng)構(gòu)建方法及Genebank公布的序列，設(shè)計并構(gòu)建具有自主知識產(chǎn)權(quán)的乳鏈菌表達系統(tǒng)；分別用這套表達系統(tǒng)表達了艱難梭菌A毒素羧基末端重復(fù)序列(14CDTA)、破傷風毒素C片段(TETC)及TETC—14CDTA
[Abstract]:Background: Clostridium difficile is one of the most important nosocomial pathogens in western industrialized countries. Clinically, about 10% of antibiotics associated with diarrhea and 75% of antibiotic associated enteritis and nearly 100% of pseudomembranous enteritis are associated with this bacterium, collectively known as Clostridium difficile associated disease (CDAD), causing billions of dollars of economic losses each year. With the further development of industry in China and the increasing use of antibiotics, the incidence of CDAD has an increasing trend. CDAD mainly occurs in patients who take antibiotics for a long time, but also in other bacteria that affect normal intestinal flora. To reduce the colonization of resistance to Clostridium difficulty, such as antitumor drugs, long-term hospitalization, immune deficiency, especially those with reduced immune function and / or the elderly. CDAD has complex clinical manifestations, ranging from asymptomatic carriers to explosive colitis. The prognosis of severe patients was poor, and the mortality was as high as 40%. Metronidazole and vancomycin are the main drugs for the treatment of this disease, but in recent years, there are Clostridium difficult to resist metronidazole and vancomycin at home and abroad, which makes it more difficult to treat Clostridium difficult, so it is very important to carry out immunological control research. Great progress has been made in the research of Clostridium difficulty vaccine, and various kinds of vaccines have appeared, but due to various reasons, its application is limited. Streptococcus lactis Lactococcus lactis (hereinafter referred to as Lactococcus lactis) is a harmless and relatively safe food industry bacterium. In recent years, Streptococcus lactis does not produce endotoxin. The protease produced is much less than Escherichia coli and is widely used to express a variety of biological polypeptides or proteins, as well as oral vaccine research work, and has been proven to be safe and effective, This method opens up a new field for oral vaccine development. At present, there is no report of live oral vaccine of Clostridium difficulty recombinant lactobacillus at home and abroad. Objective and significance: because Streptococcus lactis expression vector has not been commercialized, it can not be obtained through purchase or donation. Therefore, we design and construct the Lactobacillus expression system with independent intellectual property rights according to some mature methods of construction of Lactobacillus expression system and the sequence published by Genebank. The expression system was used to express the carboxyl terminal repeat sequence (14CDTA), tetanus toxin C fragment (TETC) and TETC-14 CDTA of Clostridium diffracta respectively.
【學位授予單位】：第一軍醫(yī)大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2006
【分類號】：R392

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本文編號：2123508