本文選題：弓形蟲 + SYBR-Green1　； 參考：《昆明醫(yī)學院》2006年碩士論文

【摘要】：目的：建立SYBR-Green1熒光定量PCR(SYBR-Green1 qPCR)檢測弓形蟲的方法，并進行實驗室方法學評價。方法：常規(guī)PCR擴增弓形蟲RH株高度保守的B1基因部分序列，經(jīng)TA克隆后轉(zhuǎn)化入大腸桿菌JM109中。提取重組質(zhì)粒PCR及測序鑒定后，作為陽性模板建立SYBR-Green1熒光定量PCR標準曲線，并做重復性試驗，對桂弓、B36蟲株及惡性瘧原蟲、血吸蟲基因組DNA、30份孕產(chǎn)婦標本、200份無償獻血者標本進行檢測。結(jié)果：用重組質(zhì)粒制作的標準曲線循環(huán)閾值與模板濃度有良好的線性關(guān)系，熔解曲線特異，相關(guān)系數(shù)0.997，平均試驗間變異系數(shù)0.81％，檢測桂弓、B36蟲株均為陽性，而檢測血吸蟲、惡性瘧原蟲基因組DNA均為陰性：孕產(chǎn)婦檢測陽性率16.7％，平均拷貝數(shù)為1.05×10~5／μl；對無償獻血者檢測均為陰性。結(jié)論：成功建立了檢測弓形蟲B1基因的SYBR-Green1熒光定量PCR方法，較常規(guī)PCR技術(shù)更快捷、敏感、準確，，適合臨床實驗室及無償獻血者的篩查應(yīng)用。
[Abstract]:Objective: to establish a method for the detection of Toxoplasma gondii by SYBR-Green1 fluorescent quantitative PCR (SYBR-Green1 qPCR) and evaluate the laboratory methodology. Methods: the highly conserved B1 gene of Toxoplasma gondii RH strain was amplified by routine PCR and transformed into E. coli JM109 by TA cloning. The standard curve of SYBR-Green1 fluorescent quantitative PCR was established as positive template after PCR and sequencing of recombinant plasmids, and the reproducibility test was carried out for the detection of B36 strain and Plasmodium falciparum strain of Plasmodium falciparum. The genomic DNA of Schistosoma japonicum was detected in 30 pregnant women and 200 free blood donors. Results: the standard curve cycle threshold of recombinant plasmids had a good linear relationship with template concentration. The fusion curve was specific, the correlation coefficient was 0.997, the average inter-test variation coefficient was 0.81%, and the detection of B36 strain was positive, but schistosoma japonicum was detected. The genomic DNA of Plasmodium falciparum was negative: the positive rate of maternal detection was 16.7g, the average copy number was 1.05 脳 10 ~ (5) / 渭 l, and that of free blood donors was negative. Conclusion: SYBR-Green1 fluorescence quantitative PCR method for detection of Toxoplasma gondii B1 gene was successfully established, which was more rapid, sensitive, accurate and suitable for screening clinical laboratory and blood donors.
【學位授予單位】：昆明醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2006
【分類號】：R346

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本文編號：2099724