發(fā)布時間：2018-07-03 17:14

  本文選題：丙型肝炎病毒 + 非結(jié)構(gòu)蛋白B��； 參考：《中南大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版)》2014年02期

【摘要】：目的:篩選表達(dá)丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)1b型非結(jié)構(gòu)蛋白4B(nonstructural protein 4B,NS4B)的慢病毒穩(wěn)定細(xì)胞株L02-NS4B差異表達(dá)基因和基因通路,為深入研究HCV NS4B在慢性丙型肝炎和肝細(xì)胞癌發(fā)生中的作用及機(jī)制提供依據(jù)。方法:將已構(gòu)建好的2株慢病毒穩(wěn)定細(xì)胞株LO2-NS4B和陰性對照慢病毒穩(wěn)定細(xì)胞株LO2-mkate2復(fù)蘇擴(kuò)增;應(yīng)用Human Gene 1.0ST芯片篩選出LO2-NS4B與LO2-mkate2差異表達(dá)基因。基于京都基因和基因組百科全書(kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)數(shù)據(jù)庫,利用Fisher精確檢驗(yàn)和卡方檢驗(yàn),對差異基因參與的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路進(jìn)行顯著性分析。應(yīng)用實(shí)時定量聚合酶鏈反應(yīng)(real-time quantitative polymerase chain reaction,real-time QPCR)方法驗(yàn)證基因芯片中5個表達(dá)上調(diào)且與凋亡有關(guān)的基因,即蛋白激酶Cδ結(jié)合蛋白(protein kinase C delta binding protein,PRKCDBP)基因、腫瘤蛋白p53(tumor protein p53,TP53)基因、v-akt鼠科胸腺瘤病毒癌基因同源物1(v-akt murine thymoma viral oncogene homolog 1,AKT1)基因、含3個桿狀病毒凋亡蛋白抑制因子重復(fù)序列(baculoviral IAP repeat containing 3,BIRC3)基因和B細(xì)胞淋巴瘤2樣1基因(B-cell lymphoma 2-like1,BCL2L1)的mRNA水平。結(jié)果:以LO2-NS4B與LO2-mkate2之間基因熒光強(qiáng)度的比值大于1.2或小于0.8為差異表達(dá)基因,在已知的28 869個人類基因中L02-NS4B中有2 682個差異表達(dá)基因,包括1 446個基因表達(dá)上調(diào)和1 236個基因表達(dá)下調(diào)。上調(diào)基因參與的顯著性信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路41項(xiàng),主要有凋亡通路、細(xì)胞外基質(zhì)受體相互作用通路、細(xì)胞周期通路、癌癥通路和Toll樣受體信號通路等;下調(diào)基因參與的顯著性信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路20項(xiàng),主要有癌癥通路、Wnt信號通路和細(xì)胞周期通路等。Real-time QPCR驗(yàn)證5個表達(dá)上調(diào)基因中有3個基因表達(dá)變化與基因芯片結(jié)果一致,分別是AKT1,BIRC3和BCL2L1,吻合率為60%。結(jié)論:HCV NS4B可以調(diào)節(jié)LO2細(xì)胞中與細(xì)胞凋亡、細(xì)胞周期和細(xì)胞增殖等有關(guān)的多種基因表達(dá),主要影響與細(xì)胞凋亡、細(xì)胞周期和癌癥相關(guān)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。
[Abstract]:Objective: to screen the differential expression gene and gene pathway of hepatitis C virus (HCV) 1b non structural protein 4B (nonstructural protein 4B, NS4B) in the lentivirus stable cell line, and to provide the basis for the in-depth study of the role and mechanism of HCV gland in the development of chronic hepatitis C and hepatocellular carcinoma. The 2 lentivirus stable cell lines LO2-NS4B and the negative control lentivirus stable cell line LO2-mkate2 were recovered and amplified, and the differential expression genes of LO2-NS4B and LO2-mkate2 were screened by Human Gene 1.0ST chip. Real-time quantitative polymerase chain reaction (real-time QPCR) was used to verify the signal transduction pathway of differential genes, and 5 genes in the gene chip, namely, protein kinase C delta binding protein (protein), were tested by real time quantitative polymerase chain reaction (polymerase chain reaction, real-time QPCR). Kinase C delta binding protein, PRKCDBP) gene, the tumor protein p53 (tumor protein p53, TP53) gene, and the oncogene homologous gene of the murine thymoma virus 1, containing 3 baculovirus apoptosis protein inhibitory factor repeat sequences MRNA levels of the 2 B-cell lymphoma 2-like1 (BCL2L1) gene for B cell lymphoma. Results: the ratio of the gene fluorescence intensity between LO2-NS4B and LO2-mkate2 is greater than 1.2 or less than 0.8, and there are 2682 differentially expressed genes in L02-NS4B among the 28869 known human genes, including 1446 gene expression up-regulated and 1. 236 genes were down regulated. There were 41 significant signal transduction pathways involved in the regulation of gene involvement, including apoptosis pathway, extracellular matrix receptor interaction pathway, cell cycle pathway, cancer pathway and Toll like receptor signaling pathway, and down regulated genes involved in significant signal transduction pathways, including cancer pathway, Wnt signaling pathway, and 20 signaling pathways. The cell cycle pathway, such as.Real-time QPCR, confirmed that 3 gene expression changes in 5 up-regulated genes were consistent with gene chip results, which were AKT1, BIRC3 and BCL2L1, and the anastomosis rate was 60%. conclusion: HCV NS4B can regulate a variety of gene expression related to apoptosis, cell cycle and cell proliferation in LO2 cells, which mainly affect the cells and cells. Apoptosis, cell cycle and cancer related signal transduction pathways.
【作者單位】： 中南大學(xué)湘雅醫(yī)院感染科;南華大學(xué)附屬第一醫(yī)院感染科;南華大學(xué)流行病學(xué)教研室;
【分類號】：R373.21

【共引文獻(xiàn)】

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3 胡娜;許楊;;基因芯片在黃曲霉毒素生物合成相關(guān)基因差異表達(dá)分析中的應(yīng)用研究[J];食品科學(xué);2009年17期

4 劉妍,王建軍,成軍,楊倩,紀(jì)冬,王春花,黨小艷,徐志強(qiáng);篩選丙型肝炎病毒非結(jié)構(gòu)蛋白4B轉(zhuǎn)染細(xì)胞差異表達(dá)基因[J];世界華人消化雜志;2004年10期

5 張彥琦,趙增煒,易東;可調(diào)FPR下利用基因芯片實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)篩選差異表達(dá)基因[J];云南大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版);2004年S2期

6 湯玉瑜;陳永文;費(fèi)蕾;吳玉章;;基因芯片篩選HepG2與HepG2.2.15細(xì)胞中的差異表達(dá)基因[J];免疫學(xué)雜志;2008年03期

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8 鄭義;羅海波;高博;黃來強(qiáng);;丙型肝炎病毒非結(jié)構(gòu)蛋白NS4B抑制IFN介導(dǎo)的抗病毒反應(yīng)[J];微生物學(xué)報;2006年05期

9 伍亞舟;易東;黃明輝;李輝智;;局部均值化方法在基因芯片標(biāo)準(zhǔn)化中的應(yīng)用研究[J];中國衛(wèi)生統(tǒng)計;2005年06期

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3 戴建威;章倩倩;劉松財;丁景華;張永亮;;慢病毒載體介導(dǎo)GHRH基因在小鼠肌肉組織表達(dá)及對生長的影響[A];全國動物生理生化第十次學(xué)術(shù)交流會論文摘要匯編[C];2008年

4 周亞鋒;楊向軍;李紅霞;蔣文平;;起搏基因HCN4慢病毒載體的構(gòu)建[A];中華醫(yī)學(xué)會第11次心血管病學(xué)術(shù)會議論文摘要集[C];2009年

5 郝林琳;劉松財;張永亮;李莉;張英;;慢病毒介導(dǎo)的小鼠生長抑素shRNA序列的設(shè)計和篩選[A];全國動物生理生化第十次學(xué)術(shù)交流會論文摘要匯編[C];2008年

6 楊剛;吳鏑;張娟;張麗芳;馬多;蔣麗娜;李夢龍;文志寧;;統(tǒng)計學(xué)方法在mRNA-Seq中的應(yīng)用[A];中國化學(xué)會第28屆學(xué)術(shù)年會第14分會場摘要集[C];2012年

7 陳丹;李東野;潘德鋒;吳培;郎婭淞;;構(gòu)建pXZ208/gfp-akt1慢病毒表達(dá)載體促心肌細(xì)胞存活[A];中華醫(yī)學(xué)會第11次心血管病學(xué)術(shù)會議論文摘要集[C];2009年

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10 單金英;張能輝;;探針隨機(jī)性分布對基因芯片納米力學(xué)行為的影響[A];中國生物醫(yī)學(xué)工程進(jìn)展——2007中國生物醫(yī)學(xué)工程聯(lián)合學(xué)術(shù)年會論文集（下冊）[C];2007年

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1 記者 季明 徐壽松;基因芯片亮相上海[N];新華每日電訊;2002年

2 周向東;基因芯片：神奇的醫(yī)生[N];中國醫(yī)藥報;2001年

3 《金周刊》記者 朱杰;基因芯片：窺見巨額利潤[N];中國經(jīng)營報;2001年

4 ;應(yīng)時而生前景燦爛[N];中國醫(yī)藥報;2002年

5 平安證券綜合研究所 馬超 高利;基因芯片：方寸之間天地寬[N];中國證券報;2000年

6 記者 蔣建科;我國研制成功新型基因芯片[N];人民日報;2001年

7 基因潮編譯;基因芯片引領(lǐng)醫(yī)學(xué)新革命[N];中國高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)導(dǎo)報;2002年

8 陳凱星 孫英威;“基因芯片”技術(shù)在哈取得重大突破[N];科技日報;2001年

9 凱;黑龍江省“基因芯片”技術(shù)獲重大突破[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報;2001年

10 趙亞萍;家畜基因芯片在美問世[N];科技日報;2003年

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3 顧祖光;基因芯片數(shù)據(jù)的系統(tǒng)生物學(xué)分析方法研究[D];南京大學(xué);2012年

4 劉學(xué)端;海底及污染環(huán)境中微生物群落分子多樣性研究[D];湖南農(nóng)業(yè)大學(xué);2003年

5 陳國鳳;乙型肝炎病毒DNA聚合酶功能域結(jié)合蛋白和反式調(diào)節(jié)基因的研究[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2005年

6 張煥容;偽狂犬病病毒、豬細(xì)小病毒和流行性乙型腦炎病毒檢測基因芯片的構(gòu)建及檢測技術(shù)研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2005年

7 胡冉;十三種化合物誘導(dǎo)的小鼠原代培養(yǎng)肝細(xì)胞基因表達(dá)譜的聚類分析[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2005年

8 鄭毅雄;人骨膜間質(zhì)祖細(xì)胞作為組織工程種子細(xì)胞的分子特征研究[D];浙江大學(xué);2006年

9 馬孟根;豬源致病性沙門氏菌耐藥基因PCR和基因芯片檢測技術(shù)研究[D];四川大學(xué);2005年

10 尹華群;在銅礦礦坑水微生物群落結(jié)構(gòu)與功能研究中基因芯片技術(shù)的發(fā)展和應(yīng)用[D];中南大學(xué);2007年

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3 郭江;丙型肝炎病毒p7蛋白反式調(diào)節(jié)作用的研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2005年

4 趙可慶;基因芯片篩選骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞與軟骨細(xì)胞的差異表達(dá)基因[D];大連醫(yī)科大學(xué);2008年

5 孟偉;Velcade（bortezomib）誘導(dǎo)K562細(xì)胞凋亡的基因表達(dá)譜研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2007年

6 杜鴻;RpoE對傷寒沙門菌高滲應(yīng)激下的基因表達(dá)調(diào)節(jié)作用[D];江蘇大學(xué);2009年

7 朱利娜;酵母基因芯片的制備及其在熱休克基因表達(dá)譜研究中的應(yīng)用[D];第一軍醫(yī)大學(xué);2002年

8 趙敏;皺紋盤鮑表達(dá)譜基因芯片研制及不同表型家系差異表達(dá)基因的初步研究[D];中國科學(xué)院研究生院（海洋研究所）;2005年

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本文編號：2094361