本文選題：人汗腺細(xì)胞 + Matrigel基底膜�。� 參考：《中國(guó)修復(fù)重建外科雜志》2014年02期

【摘要】：目的探討人體外泌汗腺組織體外三維培養(yǎng)方法,并對(duì)構(gòu)建的三維組織進(jìn)行形態(tài)學(xué)分析。方法取整形手術(shù)患者自愿捐贈(zèng)的正常腹部全層皮膚,經(jīng)Ⅱ型膠原酶消化分離人體外泌汗腺組織,以含5 ng/mL重組人EGF、25 mg/mL牛垂體提取物、100 U/mL青霉素和100μg/mL鏈霉素的無(wú)血清角質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況。待原代細(xì)胞達(dá)80%融合后,調(diào)整細(xì)胞濃度至1×105個(gè)/mL;取0.3 mL細(xì)胞懸液與0.3 mL Matrigel基底膜基質(zhì)混勻培養(yǎng),倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況。培養(yǎng)14 d后,取標(biāo)本行冰凍切片,HE染色觀察細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu),免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)細(xì)胞角蛋白7(cytokeratin 7,CK7)和CK19抗原表達(dá)。結(jié)果倒置相差顯微鏡觀察示,經(jīng)Ⅱ型膠原酶消化后大量汗腺組織游離;貼壁后3~5 d長(zhǎng)出汗腺細(xì)胞,細(xì)胞持續(xù)分裂達(dá)2~3周,形成圍繞汗腺組織塊的環(huán)狀單層;3~4周后細(xì)胞衰老。汗腺細(xì)胞接種于Matrigel基底膜基質(zhì)中2~3 d,細(xì)胞開始分裂,隨后形成小細(xì)胞團(tuán)、管狀結(jié)構(gòu)以及類球狀結(jié)構(gòu);約2周時(shí)混合培養(yǎng)物開始液化,培養(yǎng)終止。HE染色示部分細(xì)胞形成中空管狀結(jié)構(gòu),管壁由1~2層細(xì)胞構(gòu)成,類似于在體汗腺的分泌部和導(dǎo)管部;免疫組織化學(xué)染色見(jiàn)培養(yǎng)的汗腺細(xì)胞CK7和CK19表達(dá)均呈陽(yáng)性。結(jié)論人汗腺細(xì)胞接種于Matrigel基底膜基質(zhì)三維培養(yǎng),形成的組織結(jié)構(gòu)模擬了在體汗腺的組織形態(tài)結(jié)構(gòu)。
[Abstract]:Objective to study the three-dimensional culture method of human exocrine sweat gland in vitro and to analyze the morphology of the three-dimensional tissue. Methods the normal abdominal whole skin donated by plastic surgery patients was digested by type 鈪，

本文編號(hào)：2094642