本文選題：肝細胞生長因子 + 基因表達　； 參考：《中華傳染病雜志》2005年03期

【摘要】：目的通過構建原核表達系統,在大腸埃希菌中表達重組人肝再生增強因子(hALR)蛋白,為各種急慢性肝損傷及肝衰竭的治療提供新的治療方法奠定基礎。方法利用正常人肝組織提取總RNA,經一步法逆轉錄聚合酶鏈反應(RTPCR)獲取hALRcDNA全序列,構建原核表達載體hALRpET28a(+)轉化大腸埃希菌(BL21),誘導表達重組hALR蛋白,以組氨酸為標簽進行蛋白純化。十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDSPAGE)和WesternBlot鑒定重組蛋白。結果經雙酶切和DNA測序證實hALRcDNA正確插入表達載體pET28a(+),成功表達并純化得相對分子質量為23000的重組蛋白,低溫誘導表達使
[Abstract]:Objective to construct a prokaryotic expression system and express recombinant human liver regeneration enhancer hALR protein in Escherichia coli to provide a basis for the treatment of acute and chronic liver injury and liver failure. Methods Total RNAs were extracted from normal human liver tissue and hALR cDNA sequence was obtained by one step reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR). The prokaryotic expression vector hALRpET28a () was transformed into Escherichia coli BL21, and the recombinant hALR protein was induced and expressed. The hALR protein was purified using histidine as label. Sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDSPAGE) and Western blot were used to identify the recombinant protein. Results by double enzyme digestion and DNA sequencing, hALR cDNA was correctly inserted into the expression vector pET28a( +). The recombinant protein with relative molecular weight of 23000 was successfully expressed and purified.
【作者單位】： 浙江大學醫(yī)學院附屬第一醫(yī)院 浙江大學醫(yī)學院附屬第一醫(yī)院 浙江大學醫(yī)學院附屬第一醫(yī)院 浙江大學醫(yī)學院附屬第一醫(yī)院 浙江大學醫(yī)學院附屬第一醫(yī)院
【基金】：國家863計劃(2003AA205150) 國家自然科學基金(30170255) 浙江省“新世紀151人才工程”基金 浙江省衛(wèi)生廳醫(yī)學科研人才基金(2001.QN01,2004B064) 浙江省中醫(yī)管理局青年人才基金(No:2002C037) 浙江省自然科學基金(Y204156)
【分類號】：TQ464

【參考文獻】

相關期刊論文 前3條

1 王愛民!071000保定,和朝平!071000保定,楊曉明,李培建!071000保定,陳惠鵬,賀福初;重組人肝再生增強因子對肝纖維化大鼠基質分解素-1基因表達的影響[J];解放軍醫(yī)學雜志;2001年07期

2 楊曉明,謝玲,邱兆華,宮鋒,吳祖澤,賀福初;肝再生增強因子的cDNA克隆、表達及表達產物的生物活性研究[J];中國生物化學與分子生物學報;1997年02期

3 邱德凱,沈敏,熊伍軍,陳穎;重組肝再生增強因子對大鼠肝纖維化的保護作用[J];肝臟;2002年01期

【共引文獻】

相關期刊論文 前10條

1 劉杞,石小楓,羅婭,張定鳳;重組人肝再生增強因子原核表達載體的構建及其在大腸桿菌中的表達[J];中華肝臟病雜志;2000年01期

2 章波,陳惠鵬,范國才,陳吉中,王清明;抗人肝再生增強因子單克隆抗體的研制[J];免疫學雜志;2000年06期

3 楊曉明,謝玲,吳祖澤,賀福初;肝部分切除后肝再生增強因子信使核糖核酸(mRNA)表達增強[J];生理學報;1997年05期

4 李英賢,賀福初;肝細胞生成素家族的分子生物學特性及作用機制研究進展[J];醫(yī)學分子生物學雜志;2003年06期

5 李青,張麗梅,劉殿武,賀宇彤,肖永紅,何海艷;肝再生增強因子重組質粒對肝纖維化大鼠的實驗治療作用[J];第三軍醫(yī)大學學報;2005年08期

6 黃志剛,劉殿武,張輝,楊維青,劉樹賢;大鼠肝再生增強因子的基因克隆[J];河北醫(yī)科大學學報;2001年06期

7 黃志剛;RT-PCR一步法克隆人肝再生增強因子基因[J];邯鄲醫(yī)學高等�？茖W校學報;2002年01期

8 楊曉明,謝玲,邱兆華,胡志遠,吳祖澤,賀福初;新型人肝再生增強因子的分子克隆及其性能研究[J];中國科學C輯;1997年05期

9 李茹冰,單中元,付泳航,楊聯萍,易學瑞,孔祥平;重組人肝增強因子工程菌JM109的發(fā)酵工藝研究[J];中國生化藥物雜志;2000年02期

10 章波,王清明,陳惠鵬;肝再生增強因子研究進展[J];生理科學進展;2001年01期

相關會議論文 前1條

1 盛吉芳;俞海英;李君;周林福;;重組人肝再生增強因子的克隆、表達及純化[A];第三屆國際暨全國肝衰竭與人工肝學術會議論文集[C];2005年

相關博士學位論文 前9條

1 王震俠;rhALR在大鼠肝部分切除及部分肝移植術后肝再生中的作用及其機制研究[D];四川大學;2007年

2 孫航;人肝再生增強因子結合肽的篩選、表達及功能研究[D];重慶醫(yī)科大學;2007年

3 潘韻;重組人肝再生增強因子（rhALR）的表達、純化及生物活性研究[D];浙江大學;2003年

4 郝艷秋;人肝再生增強因子基因克隆、表達、生物活性及應用研究[D];東北農業(yè)大學;2003年

5 劉剛;肝細胞生成素（HPO）結構與功能的研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院;2003年

6 王昌源;多房棘球絳蟲亞單位疫苗及DNA疫苗初步研究[D];重慶醫(yī)科大學;2003年

7 林瑩;肝再生增強因子調控細胞增殖及其與鈉、鉀ATP酶關系研究[D];華南理工大學;2006年

8 石小楓;1.肝再生增強因子對外原性抗原引起機體免疫應答影響的初步研究 2.病毒性肝炎肝衰竭患者死亡原因分析 3.聚乙二醇化干擾素α-2a治療HBeAg陽性的慢性乙型肝炎及其應用于拉米夫定耐藥的初步臨床觀察[D];重慶醫(yī)科大學;2006年

9 鄧建川;人肝再生增強因子相互作用蛋白的研究[D];重慶醫(yī)科大學;2006年

相關碩士學位論文 前10條

1 陳俊杰;重組人肝再生增強因子的表達和活性研究[D];沈陽藥科大學;2007年

2 余慧峰;ALR在畢赤酵母中表達及生物活性研究[D];重慶醫(yī)科大學;2002年

3 趙春麗;人肝再生增強因子基因的克隆、真核表達載體構建及原核表達[D];東北農業(yè)大學;2003年

4 謝華;rALR對大鼠單個核細胞作用的初步研究[D];重慶醫(yī)科大學;2004年

5 郭書權;睪丸組織及精液中肝再生增強因子的研究[D];重慶醫(yī)科大學;2004年

6 俞海英;重組人肝再生增強因子的克隆、表達及純化[D];浙江大學;2005年

7 劉蔚;重組人肝再生增強因子反式激活作用的研究[D];鄭州大學;2005年

8 杜U，

本文編號：2010112