本文選題：趨化因子受體 + 慢病毒��； 參考：《華中科技大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)》2014年01期

【摘要】：目的探討構(gòu)建大鼠趨化因子受體4(CXCR4)基因過(guò)表達(dá)慢病毒載體的技術(shù)方法并檢測(cè)其體外表達(dá)目的基因的水平。方法設(shè)計(jì)CXCR4基因引物,采用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)擴(kuò)增CXCR4基因片段;用AgeⅠ酶切GV208載體;通過(guò)連接酶將CXCR4基因片段連接至線性化的GV208載體上;運(yùn)用PCR方法鑒定陽(yáng)性克隆的CXCR4-GV208載體;按GV208慢病毒包裝試劑盒說(shuō)明書(shū)包裝慢病毒并運(yùn)用實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)(RT-qPCR)法行滴度檢測(cè);然后用重組慢病毒轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞(人胚腎細(xì)胞),觀察GFP表達(dá)。結(jié)果通過(guò)PCR成功地?cái)U(kuò)增了CXCR4基因片段并連接到了GV208病毒載體上,通過(guò)PCR及DNA測(cè)序鑒定,證明CXCR4-GV208質(zhì)粒構(gòu)建正確,重組慢病毒轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞后可觀察到熒光及蛋白表達(dá)。包裝過(guò)表達(dá)慢病毒并測(cè)其濃縮滴度為2.0×108 TU/mL。結(jié)論成功構(gòu)建CXCR4-GV208慢病毒載體,為CXCR4基因的后期研究提供了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
[Abstract]:Objective to investigate the technique of constructing rat chemokine receptor 4 (CXCR4) gene overexpression lentivirus vector and to detect the expression level of its target gene in vitro. Methods CXCR4 gene primers were designed, CXCR4 gene fragments were amplified by polymerase chain reaction (PCR), GV208 vector was digested with Age 鈪，

本文編號(hào)：1970536