單純皰疹病毒Ⅱ型CTL表位gD DNA疫苗的構(gòu)建及免疫學(xué)性質(zhì)研究
發(fā)布時(shí)間:2018-05-30 10:31
本文選題:HSV-2病毒 + gD蛋白; 參考:《第一軍醫(yī)大學(xué)》2006年碩士論文
【摘要】:生殖器皰疹(genital herpes,GH)主要由單純皰疹病毒Ⅱ型(Herpes Simplex Virus Ⅱ,HSV-2)感染所致。GH近年來發(fā)病率明顯上升,是當(dāng)前全球范圍內(nèi)對人類健康危害較嚴(yán)重的性傳播疾病。HSV-2初發(fā)感染后,感染者易終生攜帶病原體,并以潛伏感染的形式局限在感覺神經(jīng)后根。該病易復(fù)發(fā),目前尚無徹底治愈的方法,,且發(fā)病率逐年上升。研制有效的生殖器皰疹病毒疫苗,是預(yù)防和治療單純皰疹病毒Ⅱ型(HSV-2)感染的關(guān)鍵。近年來,新型的DNA疫苗由于能誘導(dǎo)出較好的細(xì)胞免疫和體液免疫而日益受到重視。 為研制有效安全,免疫原性好的疫苗,各國學(xué)者一直不斷地探討,本研究針對Ⅱ型單純皰疹病毒(HSV-2)包膜糖蛋白gD以及包膜糖蛋白gB的細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)表位,構(gòu)建重組真核表達(dá)質(zhì)粒pVAX-gD-CTL。研究重組質(zhì)粒pVAX-gD-CTL在COS-7細(xì)胞中的表達(dá),評價(jià)其激發(fā)動(dòng)物產(chǎn)生免疫反應(yīng),特別是細(xì)胞免疫反應(yīng)的應(yīng)答。 首先根據(jù)Gene Bank提供的HSV-2 333株糖蛋白D基因(gD)序列設(shè)計(jì)PCR引物,以已構(gòu)建好的pc-gD為模板,特異性擴(kuò)增HSV-2 gD片段,將其克隆于pVAX1載體中構(gòu)建質(zhì)粒pVAX-gD,再將其雙酶切后引入CTL片段,構(gòu)建重組質(zhì)粒pVAX-gD-CTL,轉(zhuǎn)化大腸桿菌后篩選陽性克隆進(jìn)行酶切及測序鑒定。將重組真核表達(dá)質(zhì)粒pVAX-gD-CTL轉(zhuǎn)染哺乳動(dòng)物細(xì)胞COS-7,免疫組化、蛋白電泳及免疫印跡方法鑒定重組質(zhì)粒的表達(dá)情況。
[Abstract]:The incidence of genital herpesvirus 鈪
本文編號:1954972
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