本文選題：PRB + PIAS3��； 參考：《中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院》2005年碩士論文

【摘要】：孕激素是一種甾體類激素,在細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖功能中發(fā)揮重要作用。孕激素功能的發(fā)揮主要通過(guò)激素與細(xì)胞內(nèi)特異的孕激素受體相互作用而產(chǎn)生,而孕激素受體PR主要有兩種亞型,即孕激素受體PRA和PRB。孕激素受體是一個(gè)結(jié)構(gòu)相似基因家族-核受體亞家族的成員,這個(gè)家族的蛋白都是配基激活轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)子。孕激素受體這兩種亞型的不同主要在于PRB在其N端的BUS區(qū)包含一段164個(gè)氨基酸的AF3區(qū)。一般來(lái)說(shuō),PRB存在于細(xì)胞漿中,在孕激素作用下,PRB會(huì)進(jìn)入細(xì)胞核發(fā)揮其轉(zhuǎn)錄活性。 PR和其他核受體的轉(zhuǎn)錄活性與蛋白的轉(zhuǎn)錄后共價(jià)修飾有關(guān),它會(huì)影響到蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)之間的相互作用。這些修飾包括蛋白質(zhì)的磷酸化、乙酰化、泛素化和SUMO化。其中SUMO化與共價(jià)結(jié)合SUMO(small ubiauitin-like modifier protein)蛋白有關(guān)。一些重要的轉(zhuǎn)錄因子,比如GR、AR、P53、c-Jun和c-Myc都與SUMO-1共價(jià)結(jié)合。與泛素化一樣,SUMO化有一組激活酶-E1、E2、E3酶,SUMO化修飾會(huì)引起蛋白質(zhì)亞細(xì)胞定位、穩(wěn)定性或者是基因的轉(zhuǎn)錄活性的改變。 本文結(jié)果顯示,我們?cè)谟眉す鈷呙韫簿劢癸@微鏡(LSCM)觀察PRB的亞細(xì)胞定位時(shí)發(fā)現(xiàn),在PIAS3的存在下,即使加入孕激素,也有大部分PRB并不進(jìn)入細(xì)胞核。這提示在PRB與PIAS3之間可能存在某種功能上的相互作用。因此,我們?cè)谌伺咛ツI細(xì)胞293T中建立了一套PRB轉(zhuǎn)錄激活熒光報(bào)告測(cè)試系統(tǒng),檢測(cè)到PIAS3對(duì)PRB轉(zhuǎn)錄激活活性有很強(qiáng)的抑制作用,并且這種抑制作用是孕激素依賴的。為了驗(yàn)證PRB與PIAS3之間是否可以相互結(jié)合,我們將PRB與PIAS3構(gòu)建到酵母表達(dá)載體上。實(shí)驗(yàn)證明PRB與PIAS3在酵母細(xì)胞中可以相互結(jié)合,并且我們找出PRB與PIAS3相互作用的區(qū)域主要是PRB的DBD結(jié)構(gòu)域。 為進(jìn)一步確認(rèn)PRB與PIAS3之間存在特異性的蛋白質(zhì)相互作用,本文進(jìn)行了體外結(jié)合實(shí)驗(yàn)(in vitro: GST pull-down)和體內(nèi)結(jié)合實(shí)驗(yàn)(in vivo: IP),并獲得了與酵母中的發(fā)現(xiàn)相一致的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。除此之外,本文還應(yīng)用激光掃描共聚焦
[Abstract]:Progesterone is a steroid hormone, which plays an important role in cell growth and proliferation. The function of progesterone is mainly produced by hormone interacting with specific progesterone receptor in cells, and PR has two subtypes: progesterone receptor (PRA) and progesterone receptor (PRB). Progesterone receptors are members of a structurally similar gene family nuclear receptor subfamily whose proteins are ligand-activated transcriptional regulators. The difference between the two subtypes of progesterone receptor is that PRB contains a 164 amino acid AF3 region in its N-terminal BUS region. Generally speaking, PRB exists in the cytoplasm, and PRB enters the nucleus to play its transcriptional activity under the action of progesterone. The transcriptional activity of PR and other nuclear receptors is related to the post-transcriptional modification of proteins, which affects the structure of proteins and the interaction between proteins. These modifications include protein phosphorylation, acetylation, ubiquification and SUMO. Among them, SUMO is related to covalent binding SUMO(small ubiauitin-like modifier protein. Some important transcription factors, such as GRARN P 53 C Jun and c-Myc, are covalently bound to SUMO-1. Similar to Ubiquitin, there is a group of activase-E _ (1) E _ (2) E _ (2) E _ (3) modified to cause subcellular localization, stability, or transcriptional activity of the gene. The results showed that when we observed the subcellular localization of PRB by laser scanning confocal microscope (LSCM), we found that in the presence of PIAS3, most of PRB did not enter the nucleus even if progesterone was added. This suggests that there may be some functional interaction between PRB and PIAS3. Therefore, we have established a PRB transcription activation fluorescence report system in human embryonic kidney cells 293T. We found that PIAS3 has a strong inhibitory effect on the activation of PRB transcription, and this inhibition is progesterone-dependent. To verify whether PRB and PIAS3 can be combined with each other, PRB and PIAS3 were constructed into yeast expression vector. The results showed that PRB and PIAS3 could bind to each other in yeast cells, and we found that the main domain of interaction between PRB and PIAS3 was the DBD domain of PRB. In order to further confirm the specific protein interaction between PRB and PIAS3, in vitro binding test (GST pull-down) and in vivo binding experiment (in Vivo: IPN) were carried out, and the results were in agreement with those found in yeast. In addition, laser scanning confocal technique is also used in this paper.
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2005
【分類號(hào)】：Q504

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本文編號(hào)：1954966