本文選題：血紅素加氧酶- + 慢病毒�。� 參考：《中國醫(yī)學科學院學報》2014年04期

【摘要】：目的構建穩(wěn)定表達人血紅素加氧酶-1(HO-1)的細胞系,探討內源性過表達HO-1對抗細胞氧化損傷的作用。方法 PCR擴增HO-1基因并將其克隆至改造的慢病毒載體pLentiLox3.7中,構建攜帶目的基因的重組質粒。用重組質粒轉染HEK293T細胞,并用Western blot檢測HO-1的表達。將重組質粒與慢病毒輔助質粒(plp1、plp2、VSVG)共同轉染HEK293T細胞,包裝有活力的慢病毒。用攜帶HO-1的慢病毒感染HEK293T細胞,篩選出能穩(wěn)定表達目的基因的單克隆,并行Western blot檢測HO-1的表達。將過氧化氫加入正常的及過表達HO-1的HEK293T細胞和人臍靜脈內皮細胞,檢測細胞內活性氧的含量。結果成功篩選出能穩(wěn)定表達HO-1的單克隆細胞系并擴大培養(yǎng),Western blot檢測其HO-1的表達明顯升高。加入過氧化氫后,過表達HO-1的HEK293T細胞和人臍靜脈內皮細胞內的活性氧明顯減少。結論成功構建了能穩(wěn)定表達人HO-1的細胞系,內源性過表達HO-1能夠對抗細胞的氧化損傷。
[Abstract]:Aim to construct a cell line stably expressing human heme oxygenase-1 (HO-1) and to investigate the role of endogenous overexpression of HO-1 in the prevention of oxidative damage. Methods the HO-1 gene was amplified by PCR and cloned into the modified lentivirus vector pLentiLox3.7 to construct the recombinant plasmid carrying the target gene. HEK293T cells were transfected with recombinant plasmid and the expression of HO-1 was detected by Western blot. The recombinant plasmid was co-transfected with lentivirus-assisted plasmids (plp1 / plp2hVSVG) into HEK293T cells and the active lentivirus was packaged. After infection of HEK293T cells with lentivirus carrying HO-1, monoclonal clones were screened for stable expression of the target gene, and HO-1 expression was detected by Western blot. Hydrogen peroxide was added to normal and overexpressed HEK293T cells and human umbilical vein endothelial cells to detect the content of reactive oxygen species in the cells. Results Monoclonal cell lines with stable expression of HO-1 were successfully screened and their HO-1 expression was detected by Western blot. After adding hydrogen peroxide, reactive oxygen species (Ros) in HEK293T cells and human umbilical vein endothelial cells (HUVEC) overexpression of HO-1 decreased significantly. Conclusion A cell line with stable expression of human HO-1 was successfully constructed, and endogenous overexpression of HO-1 could antagonize oxidative damage.
【作者單位】： 中國醫(yī)學科學院北京協(xié)和醫(yī)學院北京協(xié)和醫(yī)院血管外科;中國醫(yī)學科學院北京協(xié)和醫(yī)學院基礎醫(yī)學研究所醫(yī)學分子生物學國家重點實驗室;
【基金】：北京市自然科學基金(7122145)~~
【分類號】：R346

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本文編號：1920819