本文選題：SARS病毒 + S蛋白��； 參考：《蘇州大學(xué)》2005年碩士論文

【摘要】：本次研究既將pUCY-SARS 質(zhì)粒中含有的SARS 病毒S 蛋白基因的部分序列,分別在大腸桿菌BL21 和家蠶細胞以及家蠶幼蟲體內(nèi)進行表達。 在大腸桿菌表達系統(tǒng)中首先將S 蛋白基因克隆到大腸桿菌表達載體pET28a(+)構(gòu)建獲重組大腸桿菌載體pET28a-S,將pET28a-S 在大腸桿菌BL21 中利用IPTG 進行誘導(dǎo)表達。 在桿狀病毒表達系統(tǒng)中將S 蛋白基因克隆到桿狀病毒轉(zhuǎn)移載體pBacPAK-His 中,構(gòu)建重組桿狀病毒轉(zhuǎn)移載體pBacPAK-S,重組桿狀病毒轉(zhuǎn)移載體pBacPAK-S 與線性化桿狀病毒BmBacPAK-6 共轉(zhuǎn)染BmN 細胞,經(jīng)篩選獲得重組桿狀病毒BmBac-S,并將其在細胞和家蠶中進行表達。 表達產(chǎn)物經(jīng)SDS-PAGE、Western Blotting 分析表明,大腸桿菌和家蠶中的表達產(chǎn)物的分子量分別為27 kDa 和30kDa 左右,重組病毒感染后的第5 天達到最高表達水平,約占血淋巴總蛋白的1.2%。另外利用金屬螯合親和層析純化方法對BmN 細胞中的表達產(chǎn)物進行純化,得到相對較純的重組蛋白。
[Abstract]:In this study, some sequences of S protein gene of SARS virus contained in pUCY-SARS plasmid were expressed in E. coli BL21, silkworm cells and silkworm larvae, respectively. In Escherichia coli expression system, S protein gene was first cloned into E. coli expression vector pET28a () to construct recombinant E. coli vector pET28a-S. pET28a-S was induced by IPTG in Escherichia coli BL21. In the baculovirus expression system, the S protein gene was cloned into the baculovirus transfer vector pBacPAK-His, and the recombinant baculovirus transfer vector pBacPAK-Swas constructed. The recombinant baculovirus transfer vector pBacPAK-S and the linearized baculovirus BmBacPAK-6 were co-transfected into BmN cells. The recombinant baculovirus BmBac-Swas obtained and expressed in cells and silkworm. SDS-PAGEN Western Blotting analysis showed that the molecular weight of the expressed products in E. coli and Bombyx mori were about 27 kDa and 30kDa respectively, and reached the highest level on the 5th day after infection, accounting for 1.2% of the total hemolymph protein. In addition, the expression product of BmN cells was purified by metal chelate affinity chromatography, and a relatively pure recombinant protein was obtained.
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2005
【分類號】：R346

【參考文獻】

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本文編號：1871161