本文選題：彎窿切斷 + PVN�。� 參考：《中國醫(yī)科大學(xué)》2007年碩士論文

【摘要】： 目的 促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素(corticotropin-releasing hormone,CRH)和精氨酸加壓素(arginine vasopressin,AVP)對于促腎上腺皮質(zhì)激素(adrenocorticotropic hormone,ACTH)的合成和分泌是兩種主要的調(diào)節(jié)肽。CRH和AVP在人類和嚙齒類存在于下丘腦室旁核(paraventricular nucleus,PVN)。這兩種肽位于正中隆起神經(jīng)終末相同的分泌顆粒中，共同釋放入垂體門脈系統(tǒng)后，對腺垂體ACTH的分泌產(chǎn)生協(xié)同效應(yīng)。CRH和AVP調(diào)節(jié)系統(tǒng)可能幫助機(jī)體處理各種應(yīng)激事件。應(yīng)激反應(yīng)的主要特征是以下丘腦-垂體-腎上腺皮質(zhì)軸(hypothalamic-pituitaryadrenocortical axis，HPA軸)激活為核心的生理和心理反應(yīng)。應(yīng)激后CRH在HPA軸中發(fā)揮重要作用，控制著HPA軸的興奮水平。AVP能增加CRH對ACTH分泌釋放的調(diào)節(jié)作用。海馬不僅是應(yīng)激損傷的敏感區(qū)，而且還是HPA軸應(yīng)激反應(yīng)的高位反饋調(diào)節(jié)中樞。但是對于海馬如何調(diào)節(jié)下丘腦的機(jī)制還不十分清楚，本研究通過大鼠穹窿切斷模型，觀察穹窿切斷對大鼠下丘腦室旁核CRH和AVP表達(dá)的影響，探討海馬對HPA軸的抑制作用是否通過穹窿介導(dǎo)，為研究海馬調(diào)節(jié)下丘腦的機(jī)制提供理論和形態(tài)學(xué)依據(jù)。 實(shí)驗(yàn)方法 1、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組 成年健康雄性Wistar大鼠90只(由中國醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供)，隨機(jī)分為穹窿切斷0天、4天、7天、10天組及相應(yīng)的假手術(shù)組(只進(jìn)行手術(shù)切口，未切斷穹窿)和正常組，每組10只。 2、建立大鼠穹窿切斷模型 大鼠經(jīng)2％戊巴比妥鈉麻醉后，，固定于腦立體定位儀(江灣IC型)，常規(guī)消毒，暴露出顱骨，于前囟后1.5mm，中線外左右各1.0mm處，用電動(dòng)開顱器鉆開顱骨，用自制雙刃刀置于腦表面，接著降刀6mm(切斷穹窿)，假手術(shù)組降刀2mm(未切斷穹窿)，刀在腦中停留5min。手術(shù)實(shí)施后在安靜條件下常規(guī)飼養(yǎng)，抗生素抗感染。 3、模型鑒定 采用Karnovsky法染色顯示海馬CA1區(qū)膽堿能神經(jīng)纖維，每組每例隨機(jī)抽取3～4張切片，Olympus光學(xué)顯微鏡下觀察。 4、免疫組織化學(xué)方法(SABC) 取正常組和術(shù)后0d、4d、7d、10d穹窿切斷組及相應(yīng)假手術(shù)組大鼠下丘腦行冰凍切片，分別用兔抗大鼠CRH(1：500)和兔抗大鼠AVP(1：1000)多克隆抗體進(jìn)行免疫細(xì)胞化學(xué)染色，Olympus光學(xué)顯微鏡下觀察、照相。同時(shí)，用替代法作陰性對照實(shí)驗(yàn)。 5、Western blotting檢測 取各組新鮮大鼠下丘腦組織，勻漿粉碎后離心，取上清，加考馬斯亮藍(lán)染液測定蛋白濃度。聚丙烯酰胺變性凝膠分離蛋白，轉(zhuǎn)印，封閉，加一抗(CRH1：1000；AVP1：2000)4℃過夜，HRP標(biāo)記IgG(1：1500)2h，DAB法顯色10 min，DH_2O漂洗，PVDF膜常溫晾干后進(jìn)行定量檢測。 6、圖像分析及統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用Motic Images Advanced 3.2圖像分析系統(tǒng)，每張切片選2個(gè)視野，計(jì)算各組平均光密度(IOD)值。Western blotting結(jié)果圖像掃描后分析各條帶的灰度值。SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，結(jié)果用(?)±s表示，各組之間進(jìn)行方差分析，p＜0.05表示有顯著性差異。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 1、模型鑒定 正常組海馬結(jié)構(gòu)CA1區(qū)錐體細(xì)胞層內(nèi)有豐富的膽堿能纖維，纖維粗細(xì)均勻且交織成網(wǎng)，很多纖維較長并形成串珠狀，末端可見終扣。穹窿切斷組海馬結(jié)構(gòu)CA1區(qū)錐體細(xì)胞層纖維變細(xì)排列紊亂且密度也降低，串珠狀纖維減少，稀疏纖維隨處可見，模型成立。 2、CRH免疫組化結(jié)果 正常組CRH免疫反應(yīng)陽性產(chǎn)物呈棕黃色斑塊狀，主要分布于PVN小細(xì)胞核周部，延伸至突起中。假手術(shù)組各組中CRH的表達(dá)與正常組相似，無明顯變化。穹窿切斷后4d未見CRH表達(dá)變化；7d開始CRH表達(dá)增強(qiáng)；10d表達(dá)尤著，細(xì)胞數(shù)目亦見增多，胞質(zhì)CRH表達(dá)明顯增強(qiáng)。 3、AVP免疫組化結(jié)果 正常組AVP免疫反應(yīng)陽性產(chǎn)物呈棕黃色細(xì)顆粒狀，主要分布于PVN神經(jīng)元細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，延伸至突起中，呈串珠狀。假手術(shù)組各組中AVP的表達(dá)與正常組相似，無明顯變化。穹窿切斷后4d未見AVP表達(dá)變化；7d開始AVP表達(dá)增強(qiáng)；10d表達(dá)顯著，細(xì)胞數(shù)目增多，胞質(zhì)AVP表達(dá)明顯增強(qiáng)。 4、Western blotting結(jié)果 Western blotting結(jié)果顯示，穹窿切斷后7d下丘腦PVN CRH蛋白含量明顯增加，呈逐漸增加趨勢，10d CRH含量表達(dá)更高，與7d比較，有顯著差異(p＜0.05)。下丘腦PVN CRH蛋白含量在正常組和假手術(shù)組中各組中有一定表達(dá)，但含量較低，且0d、4d、7d、10d變化不明顯。 結(jié)論 穹窿切斷使下丘腦室旁核CRH和AVP表達(dá)升高，HPA軸活動(dòng)增強(qiáng)，海馬對HPA軸的抑制作用減弱，提示海馬可能是通過穹窿纖維對HPA軸發(fā)揮抑制作用。
[Abstract]:Purpose






The synthesis and secretion of corticotropin - releasing hormone and arginine vasopressin ( AVP ) in corticotropin - releasing hormone ( ACTH ) is two main regulatory peptides . These two peptides are located in the same secretory granules at the terminal end of the median eminence , and are co - released into the pituitary portal system to exert a synergistic effect on the secretion of ACTH in the pituitary . The main feature of the stress response is that the hypothalamus - pituitary - adrenal cortex axis ( HPA axis ) is activated as the core physiological and psychological response . The main feature of stress response is that the hypothalamus - pituitary - adrenal cortex axis ( HPA axis ) is activated as the core physiological and psychological response .






experimental method






1 . Experimental animals and groups






Ninety - nine adult male Wistar rats were randomly divided into fornical group ( 0 days , 4 days , 7 days , 10 days group ) and corresponding sham operation group ( only surgical incision , uncut vault ) and normal group ( 10 rats in each group ) .






2 . Establishment of rat vault cutting model






After the rats were anesthetized with 2 % sodium opental sodium , fixed to the brain stereotaxic instrument ( Jiangwan IC type ) , the skull was exposed by conventional disinfection , the skull was exposed at the distance of 1.5 mm from the anterior fontanel , 1.0 mm from the midline , then 6 mm ( cut off the dome ) , the knife was left in the brain for 5 min . After operation , routine feeding was performed under quiet conditions , and the antibiotic was infected with antibiotics .






3 . Model Identification






The cholinergic nerve fibers in CA1 region of hippocampus were stained with Karnosky method . Each group was randomly divided into 3 锝

本文編號：1835348