本文選題：椎間盤退變 + 髓核間充質(zhì)干細(xì)胞��； 參考：《中國脊柱脊髓雜志》2014年05期

【摘要】：目的:比較來源于正常與退變髓核的髓核間充質(zhì)干細(xì)胞(NPMSCs)的細(xì)胞代謝活性及干性基因表達(dá)情況。方法:收集6例非退變患者髓核組織(正常組)與6例腰椎間盤突出癥患者的退變髓核組織(退變組),采用酶消化法分離細(xì)胞,應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基(standard MSC culture medium)進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)并觀察細(xì)胞形態(tài)。兩組內(nèi)各取1例分離得到的細(xì)胞進(jìn)行流式細(xì)胞儀檢測間充質(zhì)干細(xì)胞表面蛋白分子標(biāo)記CD90、CD105、CD73、CD45、CD34及人類白細(xì)胞抗原(HLA)-DR表達(dá)情況;并進(jìn)行成骨、成脂及成軟骨誘導(dǎo)分化,誘導(dǎo)28d后分別應(yīng)用茜素紅染色鑒定細(xì)胞成骨能力、油紅O染色鑒定細(xì)胞成脂能力、甲苯胺藍(lán)染色鑒定細(xì)胞成軟骨分化能力,并按照國際干細(xì)胞治療協(xié)會(ISCT)提出的間充質(zhì)干細(xì)胞的判定標(biāo)準(zhǔn),對分離得到的細(xì)胞進(jìn)行綜合評估鑒定。采用CCK-8檢測兩組P2代NPMSCs的代謝活力。提取兩組每例P2代細(xì)胞總RNA,行RT-PCR檢測P2代細(xì)胞"干性維持"相關(guān)基因Oct4及Nanog表達(dá)情況。結(jié)果:兩組P0代細(xì)胞均貼壁生長,形態(tài)學(xué)方面兩組并無明顯差異。免疫表型鑒定顯示正常組和退變組間充質(zhì)干細(xì)胞表面分子標(biāo)記CD90、CD105、CD73表達(dá)比例分別高達(dá)96%、98%、95%以上,兩組均低表達(dá)造血細(xì)胞標(biāo)志物CD45、CD34、HLA-DR(均低于4%)。茜素紅染色、油紅O染色及甲苯胺藍(lán)染色分別證實(shí)正常組與退變組細(xì)胞均可向骨、脂肪及軟骨細(xì)胞三系誘導(dǎo)分化。上述結(jié)果證實(shí)分離得到的細(xì)胞即NPMSCs。細(xì)胞代謝活性測定示P2代細(xì)胞在培養(yǎng)后5d、7d、9d、11d、13d正常組細(xì)胞活性均強(qiáng)于退變組,兩組細(xì)胞活性有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。正常組"干性維持"相關(guān)基因Oct4及Nanog表達(dá)量分別為退變組的4.63±1.17、7.36±1.19倍,正常組均明顯高于退變組(P0.05)。結(jié)論:正常與退變髓核組織內(nèi)均存在NPMSCs,但正常椎間盤來源的NPMSCs具有較強(qiáng)的細(xì)胞代謝活性,較"強(qiáng)的"干性維持"基因表達(dá)。
[Abstract]:Aim: to compare the cellular metabolic activity and dry gene expression of nucleus pulposus mesenchymal stem cells (NPMSCs) from normal and degenerated nucleus pulposus. Methods: the degenerative nucleus pulposus tissues were collected from 6 patients with non-degenerative nucleus pulposus (normal group) and 6 patients with lumbar disc herniation (degenerative group). Standard MSC culture medium was used for cell culture and cell morphology was observed. Flow cytometry was used to detect the expression of CD90, CD105, CD73, CD45, CD34 and HLA-DR, and to induce differentiation of mesenchymal stem cells by osteogenesis, adipogenesis and chondrogenesis. After 28 days of induction, alizarin red staining was used to identify the osteogenic ability of the cells, oil red O staining was used to identify the lipophilic ability of the cells, and toluidine blue staining was used to identify the cartilage differentiation ability of the cells. According to the criteria of mesenchymal stem cells proposed by the International Stem Cell Therapy Association (ISCT), the isolated cells were comprehensively evaluated and identified. The metabolic activity of P2 generation NPMSCs was detected by CCK-8. The total RNAs of P2 generation cells were extracted from two groups, and the expression of Oct4 and Nanog related to dryness maintenance of P2 generation cells was detected by RT-PCR. Results: the P 0 passage cells of the two groups were adherent to the wall, and there was no significant difference in morphology between the two groups. Immunophenotypic identification showed that the expression of CD90, CD105, CD73 on the surface of mesenchymal stem cells in normal group and degenerative group was above 9698,95%, respectively. Both groups expressed low expression of hematopoietic marker CD45, CD34, HLA-DR3 (all lower than 4%). Alizarin red staining, oil red O staining and toluidine blue staining confirmed that cells in normal group and degenerative group could differentiate into bone, fat and chondrocytes. The above results confirmed that the isolated cells were NPMSCs. The cell metabolic activity of P2 generation cells was higher than that of the degenerative group on the 5th day, 7d, 9d, 9d and 13d after culture, and there was a significant difference between the two groups (P 0.05). The expression of Oct4 and Nanog in the normal group was 4.63 鹵1.177.36 鹵1.19 times of that in the degenerative group, which was significantly higher than that in the degenerative group (P 0.05). Conclusion: NPMSCs exist in both normal and degenerative nucleus pulposus, but NPMSCs derived from normal intervertebral disc has stronger cellular metabolic activity and stronger gene expression of "dry maintenance" than that of "dry maintenance".
【作者單位】： 南方醫(yī)科大學(xué)第三臨床醫(yī)學(xué)院附屬海軍總醫(yī)院骨科;
【基金】：國家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目(編號:81171740)
【分類號】：R363

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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【二級參考文獻(xiàn)】

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本文編號：1822433