本文選題：BTV + dsRNA�。� 參考：《武漢大學(xué)》2005年碩士論文

【摘要】：干擾素(Interferon,IFN)是一類廣譜抗病毒物質(zhì),是由培養(yǎng)的細(xì)胞或人體及動(dòng) 物體因病毒感染或其他干擾素誘生劑(Interferon inducer)作用所產(chǎn)生的一類非特異性 抗病毒和抗腫瘤物質(zhì)。能誘導(dǎo)IFN產(chǎn)生的物質(zhì)統(tǒng)稱為干擾素誘導(dǎo)劑,理想的能直接應(yīng) 用于人體內(nèi)誘生IFN的IFN誘導(dǎo)劑目前首推多聚肌苷酸(Polyinosinic Polycytidylic Acid,Poly[I:C],簡稱PIC),但近來發(fā)現(xiàn)PIC在人體和其他靈長類體內(nèi)易被血清核 酸酶破壞,誘生IFN的效能較低。據(jù)此,國內(nèi)外科研工作者正在努力尋求和發(fā)展新的 能用于人體的干擾素誘導(dǎo)劑。本文擬探討不感染人正常細(xì)胞,不引起人任何疾病的動(dòng) 物藍(lán)舌病毒及其基因組dsRNA分子是否具有誘導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生IFN的潛能和誘導(dǎo)腫瘤細(xì) 胞凋亡的能力。 藍(lán)舌病毒(Bluetongue Virus,BTV)是呼腸孤病毒科,環(huán)狀病毒屬成員,是引起綿 羊和野生反芻動(dòng)物藍(lán)舌病的病原體,牛、山羊和鹿則是該病毒的儲(chǔ)存宿主。BTV的全 套遺傳信息由10個(gè)基因組片段組成,全基因組由19218個(gè)bp組成,總分子量為13× 10~6道爾頓,是迄今為止分子量最大的RNA病毒。藍(lán)舌病毒基因組dsRNA的全套遺 傳信息的特殊結(jié)構(gòu)為其奠定了作為內(nèi)源性IFN誘導(dǎo)劑的可能性和無限潛力,當(dāng)提取到 的病毒核酸片段進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)時(shí),因?yàn)榇嬖谟诓《緝?nèi)衣殼上的依賴RNA的RNA聚合酶 被去掉以及BTV基因組dsRNA分子非整倍體進(jìn)入而使該核酸失去了感染性,但卻保 持病毒雙鏈RNA誘生IFN的生物學(xué)功能,而且將比其病毒顆粒對機(jī)體而言更安全有 效。 本文將藍(lán)舌病毒標(biāo)準(zhǔn)株(BTV-10)的基因組dsRNA通過Trizol提取后,利用脂 質(zhì)體轉(zhuǎn)染技術(shù),轉(zhuǎn)染人宮頸癌Hela細(xì)胞和人胚肺原代HEL細(xì)胞;以BTV-10分別感染 Hela細(xì)胞和HEL細(xì)胞;以及直接將裸露的dsRNA加入兩種細(xì)胞培養(yǎng)物,以比較研究 這三種處理后細(xì)胞形態(tài)學(xué)差異,利用檢測β-IFN的ELISA試劑盒檢測細(xì)胞上清液中 IFN含量,并用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡率。最終通過統(tǒng)計(jì)學(xué)方法分析三種處理?xiàng)l件 下不同用量的病毒和不同濃度的dsRNA-脂質(zhì)體復(fù)合物及裸露dsRNA產(chǎn)生IFN含量的 差異。 實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn),BTV及其dsRNA分子均具有誘導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生IFN的生物學(xué)功能,
[Abstract]:Interferon Interferon IFN (IFN) is a class of broad-spectrum antiviral substances, consisting of cultured cells or humans and animals. A class of nonspecificity produced by virus infection or other interferon inducer (Interferon inducer). Antiviral and antitumor substances. The substances that can induce the production of IFN are called interferon inducers. The IFN inducer used to induce IFN in human body is currently the first to introduce polyinosinic Polycytidylic acidosis Poly (I: C), but recently it has been found that PIC is susceptible to the nucleation of serum in humans and other primates. The activity of IFN induced by acidase was low. Based on this, researchers at home and abroad are working hard to find and develop new Interferon inducer that can be used in human body. This paper intends to explore the motility that does not infect human normal cells and does not cause any disease in human beings. Does the Bluetongue virus and its Genomic dsRNA molecules have the potential to induce IFN production by cells and to induce tumor fineness The ability to apoptosis. Bluetongue virus (BTV) is a member of the family Reoviridae, a member of the genus Cyclovirus, which causes cotton. The pathogen of blue-tongue disease in sheep and wild ruminants, cattle, goats and deer are the storage hosts of the virus. BTV The nested genetic information consists of 10 genomic fragments and the whole genome consists of 1921 BP with a total molecular weight of 13 脳. One hundred and six Dalton, the largest molecular weight of the RNA virus so far. A complete set of Genomic dsRNA of Bluetongue virus The special structure of transmitting information establishes the possibility and infinite potential as an endogenous IFN inducer. When the viral nucleic acid fragment of the virus enters the cell because of the RNA-dependent RNA polymerase that exists on the virus underwear shell Removal and entry of aneuploidy of BTV genomic dsRNA molecule make the nucleic acid lose its infectivity, but protect The biological function of IFN induced by virus-holding double-stranded RNA will be safer than its viral particles. Effect. The genomic dsRNA of blue tongue virus strain BTV-10 was extracted by Trizol. The plastid transfection technique was used to transfect human cervical cancer Hela cells and human embryonic lung primary HEL cells. Hela cells and HEL cells; and direct addition of bare dsRNA to two cell cultures for comparative study After these three treatments, the cell morphology was different, and the cell supernatant was detected in the supernatant by ELISA kit for detection of 尾 -IFN. IFN content and apoptosis rate were detected by flow cytometry. Finally, the three processing conditions were analyzed by statistical method. Under different doses of virus and different concentrations of dsRNA-liposome complexes and naked dsRNA to produce IFN content Difference. It was found that both BTV and its dsRNA molecules have the biological function of inducing cells to produce IFN.
【學(xué)位授予單位】：武漢大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2005
【分類號(hào)】：R346

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本文編號(hào)：1801030