抑制性差減雜交結(jié)合cDNA芯片篩選家兔高脂血癥及動(dòng)脈粥樣硬化相關(guān)基因
本文選題:動(dòng)脈粥樣硬化 + 高脂血癥; 參考:《南京醫(yī)科大學(xué)》2005年博士論文
【摘要】:目的:探尋與AS發(fā)生發(fā)展相關(guān)的調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝、氨基酸代謝、糖代謝、炎癥反應(yīng)、免疫應(yīng)答、變態(tài)反應(yīng)等的肝臟差異表達(dá)基因,明確肝臟在高脂血癥和AS發(fā)生中的作用。 方法:通過(guò)給新西蘭白兔喂飼高膽固醇飲食復(fù)制高脂血癥-As動(dòng)物模型。根據(jù)其血清膽固醇含量分為敏感組和不敏感組。分別取兩組動(dòng)物的肝臟,抽提總RNA,并分離mRNA,以造型敏感組為受檢者(tester)、造型不敏感組為驅(qū)動(dòng)者(driver),進(jìn)行正向SSH;在反向SSH中則相反。經(jīng)兩輪雜交及兩次抑制性PCR,將產(chǎn)物與T/A載體連接構(gòu)建cDNA差減文庫(kù),并轉(zhuǎn)化大腸桿菌進(jìn)行文庫(kù)擴(kuò)增。 隨機(jī)挑取800個(gè)陽(yáng)性克隆,以插入片段兩側(cè)載體序列PinPoint和Sp6為引物PCR擴(kuò)增,PCR產(chǎn)物經(jīng)濃縮、變性處理,點(diǎn)于尼龍膜上,制成cDNA芯片。提取造型敏感組和不敏感組兔肝mRNA,反轉(zhuǎn)錄后經(jīng)同位素~(33)P標(biāo)記,分別與兩張相同的芯片雜交,獲取量化的雜交信號(hào)。 將差異表達(dá)克隆測(cè)序,所得結(jié)果通過(guò)Blastn軟件與GenBank中的已知核苷酸序列進(jìn)行查詢(xún)和同源比較。選取6條基因,通過(guò)熒光半定
[Abstract]:Aim: to explore the differentially expressed genes related to the regulation of lipid metabolism, amino acid metabolism, glucose metabolism, inflammation, immune response and allergic reaction, and to clarify the role of liver in hyperlipidemia and as. Methods: hyperlipidemia-as animal model was established by feeding New Zealand white rabbits with high cholesterol diet. According to its serum cholesterol content, it was divided into sensitive group and insensitive group. The total RNAs were extracted from the liver of the two groups, and the mRNAs were isolated. The positive SSH was carried out in the sculpt sensitive group and the modeling insensitive group as the driver. The cDNA subtractive library was constructed by two rounds hybridization and two inhibition PCR. The product was linked with the T / A vector and transformed into E. coli to amplify the library. Eight hundred positive clones were randomly selected. The PCR products were condensed and denatured with the primers of PinPoint and Sp6 on both sides of the inserted fragments. The cDNA microarray was made by placing them on the nylon membrane. The rabbit liver mRNAs were extracted from the sensitive and insensitive groups, and then labeled with the isotopic mRNAs, then hybridized with two identical microarrays, respectively, to obtain the quantitative hybridization signals. The differentially expressed clones were sequenced. The results were queried and homologous compared with known nucleotide sequences in GenBank by Blastn software. Six genes were selected, and the results were determined by fluorescence semidefinite.
【學(xué)位授予單位】:南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:博士
【學(xué)位授予年份】:2005
【分類(lèi)號(hào)】:R346
【相似文獻(xiàn)】
相關(guān)期刊論文 前10條
1 王樹(shù)元;;高脂血癥患者的食補(bǔ)食療方選[J];食品與健康;2002年02期
2 陸英儀;;高脂血癥危害多[J];心血管病防治知識(shí);2004年05期
3 張華;李建瑛;阿依姑麗·艾合麥提;;野山杏果肉的保肝作用及其對(duì)高脂血癥小鼠血脂的影響[J];華西藥學(xué)雜志;2011年04期
4 張惠霞;;加強(qiáng)社區(qū)醫(yī)院血脂管理預(yù)防心血管疾病[J];醫(yī)學(xué)信息(上旬刊);2011年06期
5 白娟;陳一江;;丹參鉻合劑對(duì)實(shí)驗(yàn)性高脂血癥模型動(dòng)脈粥樣硬化的干預(yù)作用[J];浙江中醫(yī)雜志;2011年07期
6 周玉娟;甘君學(xué);;針灸治療高脂血癥的近代研究[J];內(nèi)蒙古中醫(yī)藥;2010年02期
7 宋興龍;汪伏兵;;伴高脂血癥的腦梗死患者同型半胱氨酸水平的研究[J];卒中與神經(jīng)疾病;2011年04期
8 裴曉陽(yáng);;高脂血癥患者如何自我防治[J];心血管病防治知識(shí);2004年05期
9 官永玉;;護(hù)理健康教育在高校高脂血癥教職工中的實(shí)施效果[J];護(hù)理研究;2011年27期
10 顧潔;;護(hù)理干預(yù)對(duì)門(mén)診高脂血癥患者的影響[J];包頭醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2011年03期
相關(guān)會(huì)議論文 前10條
1 薛南榮;梁因棟;劉鐵漢;錢(qián)學(xué)賢;王勝春;;脈速凈對(duì)家兔動(dòng)脈粥樣硬化影響的研究[A];第二屆全國(guó)心功能學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要匯編[C];1990年
2 姜鴻;雷清鳳;吳慶;程駿章;;血液透析-灌流治療高脂血癥的臨床觀察[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)腎臟病學(xué)分會(huì)2006年學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2006年
3 魏育林;金恩源;李亞俊;劉軒;;紅參預(yù)防高脂血癥及動(dòng)脈粥樣硬化作用及其機(jī)制探討[A];第五次全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合血瘀證及活血化瘀研究學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編[C];2001年
4 嚴(yán)潔;常小榮;岳增輝;沈菁;曹湘平;;隔藥餅灸對(duì)兔HLP合并AS主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞黏附因子VCAM-1mRNA、E-selmRNA表達(dá)的影響[A];全國(guó)針?lè)ň姆ㄅR床與科研學(xué)術(shù)研討會(huì)暨脊柱病研究新進(jìn)展論文匯編[C];2005年
5 唐愛(ài)華;范冠杰;李雙蕾;唐咸玉;羅廣波;周衛(wèi)惠;鐘金清;;化濁降脂方治療2型糖尿病并高脂血癥療效觀察[A];第七次全國(guó)中醫(yī)糖尿病學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編[C];2003年
6 羅瓊;李瑾偉;張聲華;;枸杞及其多糖對(duì)家兔血脂的影響[A];中國(guó)營(yíng)養(yǎng)學(xué)會(huì)第七屆全國(guó)營(yíng)養(yǎng)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要匯編[C];1996年
7 堤一彥;尹衛(wèi)東;袁中華;;脂蛋白脂酶與動(dòng)脈粥樣硬化[A];中國(guó)病理生理學(xué)會(huì)動(dòng)脈粥樣硬化專(zhuān)業(yè)委員會(huì)五屆一次會(huì)議論文集[C];2002年
8 李永偉;;C-反應(yīng)蛋白檢測(cè)在高脂血癥中的應(yīng)用[A];第五次全國(guó)中青年檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2006年
9 梁晉普;楊惠民;;載脂蛋白E基因多態(tài)性與高脂血癥痰瘀證患者血脂水平關(guān)系的研究[A];《全國(guó)中醫(yī)藥防治老年病及老年呼吸疾病學(xué)術(shù)講壇》學(xué)術(shù)論文集[C];2007年
10 梁晉普;楊惠民;;高脂血癥痰瘀證患者ApoE基因多態(tài)性分布特點(diǎn)及其與血脂水平關(guān)系的臨床研究[A];中華中醫(yī)藥學(xué)會(huì)中醫(yī)老年醫(yī)學(xué)年會(huì)學(xué)術(shù)論文集[C];2008年
相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條
1 鄢盛愷 程歆琦 李君;什么人需要檢查血脂[N];家庭醫(yī)生報(bào);2006年
2 李景悅;高脂血癥的控制與治療[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2010年
3 劉云濤;高甘油三酯血癥與動(dòng)脈粥樣硬化關(guān)系有新發(fā)現(xiàn)[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2007年
4 河北醫(yī)大一院 主任醫(yī)師 楊秀芬 醫(yī)師 蘇冠麗;高脂血癥也“傷心”[N];家庭醫(yī)生報(bào);2009年
5 殼寡糖與人類(lèi)未來(lái)健康工程專(zhuān)家委員會(huì)委員、研究員 宋志蘭;動(dòng)脈粥樣硬化:健康的嚴(yán)峻挑戰(zhàn)[N];保健時(shí)報(bào);2010年
6 武漢大學(xué)中山醫(yī)院主任醫(yī)師 李定國(guó);撩開(kāi)高脂血癥的面紗[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2010年
7 市一院心內(nèi)科副主任醫(yī)師 羊鎮(zhèn)宇;如何預(yù)防高脂血癥[N];無(wú)錫日?qǐng)?bào);2006年
8 明秀;痰濕內(nèi)阻型高脂血癥的治療[N];民族醫(yī)藥報(bào);2007年
9 楊惠民 北京中醫(yī)藥大學(xué)東直門(mén)醫(yī)院;從肝脾腎辨治高脂血癥[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2010年
10 本報(bào)記者 孟剛;治療高脂血癥時(shí)須持續(xù)用藥[N];中國(guó)消費(fèi)者報(bào);2007年
相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條
1 劉軍蓮;高脂血癥及動(dòng)脈粥樣硬化痰瘀證候的蛋白質(zhì)組學(xué)研究[D];中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院;2006年
2 金f幬,
本文編號(hào):1796903
本文鏈接:http://sikaile.net/yixuelunwen/binglixuelunwen/1796903.html