本文選題：動脈粥樣硬化 + 高脂血癥　； 參考：《南京醫(yī)科大學》2005年博士論文

【摘要】：目的:探尋與AS發(fā)生發(fā)展相關(guān)的調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝、氨基酸代謝、糖代謝、炎癥反應、免疫應答、變態(tài)反應等的肝臟差異表達基因,明確肝臟在高脂血癥和AS發(fā)生中的作用。 方法:通過給新西蘭白兔喂飼高膽固醇飲食復制高脂血癥-As動物模型。根據(jù)其血清膽固醇含量分為敏感組和不敏感組。分別取兩組動物的肝臟,抽提總RNA,并分離mRNA,以造型敏感組為受檢者(tester)、造型不敏感組為驅(qū)動者(driver),進行正向SSH;在反向SSH中則相反。經(jīng)兩輪雜交及兩次抑制性PCR,將產(chǎn)物與T/A載體連接構(gòu)建cDNA差減文庫,并轉(zhuǎn)化大腸桿菌進行文庫擴增。 隨機挑取800個陽性克隆,以插入片段兩側(cè)載體序列PinPoint和Sp6為引物PCR擴增,PCR產(chǎn)物經(jīng)濃縮、變性處理,點于尼龍膜上,制成cDNA芯片。提取造型敏感組和不敏感組兔肝mRNA,反轉(zhuǎn)錄后經(jīng)同位素~(33)P標記,分別與兩張相同的芯片雜交,獲取量化的雜交信號。 將差異表達克隆測序,所得結(jié)果通過Blastn軟件與GenBank中的已知核苷酸序列進行查詢和同源比較。選取6條基因,通過熒光半定
[Abstract]:Aim: to explore the differentially expressed genes related to the regulation of lipid metabolism, amino acid metabolism, glucose metabolism, inflammation, immune response and allergic reaction, and to clarify the role of liver in hyperlipidemia and as. Methods: hyperlipidemia-as animal model was established by feeding New Zealand white rabbits with high cholesterol diet. According to its serum cholesterol content, it was divided into sensitive group and insensitive group. The total RNAs were extracted from the liver of the two groups, and the mRNAs were isolated. The positive SSH was carried out in the sculpt sensitive group and the modeling insensitive group as the driver. The cDNA subtractive library was constructed by two rounds hybridization and two inhibition PCR. The product was linked with the T / A vector and transformed into E. coli to amplify the library. Eight hundred positive clones were randomly selected. The PCR products were condensed and denatured with the primers of PinPoint and Sp6 on both sides of the inserted fragments. The cDNA microarray was made by placing them on the nylon membrane. The rabbit liver mRNAs were extracted from the sensitive and insensitive groups, and then labeled with the isotopic mRNAs, then hybridized with two identical microarrays, respectively, to obtain the quantitative hybridization signals. The differentially expressed clones were sequenced. The results were queried and homologous compared with known nucleotide sequences in GenBank by Blastn software. Six genes were selected, and the results were determined by fluorescence semidefinite.
【學位授予單位】：南京醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2005
【分類號】：R346

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本文編號：1796903