本文選題：真菌性角膜炎 + 煙曲霉菌��； 參考：《同濟大學》2006年碩士論文

【摘要】： 目的：建立大鼠煙曲霉菌性角膜炎動物模型。探討煙曲霉菌感染角膜組織后角膜局部的免疫病理機制。 方法：刮除大鼠角膜上皮層，以右眼為實驗眼，在角膜面與自制角膜接觸鏡之間直接涂抹培養(yǎng)的菌落或滴加不同濃度的孢子懸液：以左眼為對照眼，在角膜面與自制角膜接觸鏡之間滴加無菌生理鹽水。觀察病程，行角膜病理切片HE和PAS染色，比較得出較好的建模方法，對病程進行合理分期。采用該方法建立實驗早期、中期、后期組及對照組。實驗組分別于接種后2天(d)、6d、2周(W)時處死取標本，對照組于接種后3d處死取標本。采用免疫組織化學方法觀察角膜組織中中性粒細胞、LC、T淋巴細胞(CD3~+T)及其亞群CD4~+T、CD8~+T淋巴細胞、B淋巴細胞的動態(tài)變化。采用逆轉錄聚合酶鏈式反應(RT-PCR)，檢測IL-6、IL-10、細胞間粘附分子-1(ICAM-1)在不同病程角膜組織中的表達。 結果：菌落直接涂抹法能穩(wěn)定且簡便的建立大鼠煙曲霉菌性角膜炎動物模型。在大鼠煙曲霉菌性角膜炎早期(接種后1-3d)，，見角膜水腫、角膜白色潰瘍浸潤灶形成，PAS染色見菌絲平行或斜形生長于角膜基質前1／3層。免疫組化見多量中性粒細胞及少量CD3~+T、CD4~+T、CD8~+T淋巴細胞和LC浸潤，未檢測到B淋巴細胞。在中期(接種后4-7d)，角膜黃白潰瘍、干燥致密。PAS染色見菌絲潰瘍灶位于角膜基質前1／3-2／3層，周圍被大量炎癥細胞包圍，中性粒細胞浸潤達高峰。免疫組化見T淋巴細胞浸潤增加，其中CD4~+T淋巴細胞多于CD8~+T淋巴細胞。LC亦增多，B淋巴細胞開始出現(xiàn)。在晚期(接種后9-14d)，角膜白斑及大量新生血管長入。病理切片見肉芽腫樣改變，PAS染色未見菌絲或孢子。免疫組化見中性粒細胞數(shù)目有所減少，T淋巴細胞浸潤達高峰，CD4~+T淋巴細胞亦多于CD8~+T淋巴細胞，B淋巴細胞少量表達。對照組角膜IL-6、IL-10、ICAM-1幾乎不表達或極微量表達。在實驗組角膜中，IL-6早期即大量表達，中期炎癥反應高峰時亦達高峰，以后逐漸下降；IL-10在早期表達最高以后逐漸下降；ICAM-1早期開始表達中期達高峰以后逐漸下降。IL-6在晚期組與對照組間無差別(p＞0.05)，余早期組、中期組、對照組間均有統(tǒng)計學意義(p＜0.01)。IL-10、ICAM-1在實驗對照組與實驗組早、中、晚期組四組間均有統(tǒng)計學意義(p＜0.01)。 結論：(1)菌落直接涂抹法是建立大鼠煙曲霉菌性角膜炎動物模型較好的方法。(2)大鼠煙曲霉菌性角膜炎病程早中期可能是大量真菌及中性粒細胞導致了角膜損傷，中后期特別是后期則可能是遲發(fā)型超敏反應導致的免疫損傷。(3)IL-6在AFK病程中是一個敏感的炎癥因子，能反映局部的炎癥反應程度。(4)IL-10在AFK病程中呈逐漸下降趨勢，早期達高峰，中晚期逐漸下降。(5)ICAM-1在局部白細胞聚集，調節(jié)炎癥反應、免疫反應強度中發(fā)揮重要作用。
[Abstract]:Objective: to establish an animal model of mycelial keratitis in rats. To investigate the immunopathologic mechanism of cornea after infection with aspergillus fumigatus. Methods: the epithelial layer of cornea of rats was scraped, the right eye was used as the experimental eye, the colony was smeared directly between the corneal surface and the self-made contact lens or the spore suspension of different concentration was added: the left eye was used as the control eye. The sterile saline was added between the corneal surface and the corneal contact lens. The course of the disease was observed, the corneal sections were stained with HE and PAS, and a better modeling method was obtained. This method was used to establish the early, middle and late experimental group and control group. The experimental group was killed 2 days after inoculation and the control group was killed 3 days after inoculation. Immunohistochemical method was used to observe the dynamic changes of CD3 ~ T and its subsets in neutrophils of the cornea, CD4 ~ T, CD8 ~ T lymphocytes and B lymphocytes. Reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR) was used to detect the expression of IL-6, IL-10 and ICAM-1 in different corneal tissues. Results: the method of colony direct smear could be used to establish the animal model of aspergillus fumigatus keratitis. In the early stage (1-3 days after inoculation), corneal edema was observed in rats with tobacco-curly fungal keratitis, and pas staining showed that mycelium grew parallel or oblique in the first third layer of corneal stroma. Immunohistochemistry showed the infiltration of many neutrophils, a small amount of CD3 ~ TnT, CD8 ~ T lymphocytes and LC, but no B lymphocytes were detected. In the middle stage (4-7 days after inoculation, yellow and white corneal ulcer, dry dense. Pas staining showed that the mycelium ulcer focus was in the first 1 / 3 / 2 / 3 layer of corneal stroma, surrounded by a large number of inflammatory cells, neutrophil infiltration reached the peak. Immunohistochemical staining showed an increase in T lymphocyte infiltration, in which CD4 ~ T lymphocytes were more than CD8 ~ T lymphocytes. LC was also increased and B lymphocytes began to appear. At the late stage (9-14 d after inoculation), corneal leukoplakia and a large number of neovascularization grew. Pathological sections showed granulomatous changes and pas staining without mycelium or spores. Immunohistochemical staining showed that the number of neutrophils decreased and the infiltration of T lymphocytes reached the peak. The number of CD4- T lymphocytes was also higher than that of CD8- T lymphocytes. In the control group, the expression of IL-6, IL-10 and ICAM-1 was almost no or very small. In the experimental group, IL-6 was highly expressed at the early stage and reached the peak at the middle stage of inflammatory response. The expression of IL-10 decreased gradually after the peak expression of ICAM-1 in the early stage and reached the peak in the middle stage. There was no difference between the late stage group and the control group (p > 0.05), while the remaining early group and the middle stage group, there was no difference between the late group and the control group. There was significant difference between control group and control group (P < 0.01). IL-10 ICAM-1 had statistical significance between experimental group and experimental group (P < 0.01). ConclusionThe colony direct smear method is a better method to establish rat model of tobacco-curving fungal keratitis. (2) in early and middle stage of the disease, a large number of fungi and neutrophils may cause corneal injury in rats. In the middle and late stage, especially in the late stage, it may be the delayed type hypersensitivity. IL-6 is a sensitive inflammatory factor in the course of AFK, and it can reflect the local inflammatory reaction degree. The IL-10 level decreases gradually in the course of AFK, and reaches the peak at the early stage. ICAM-1 decreased gradually in late stage and played an important role in local leukocyte aggregation, regulation of inflammatory response and the intensity of immune response.
【學位授予單位】：同濟大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2006
【分類號】：R-332;R772.21

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