本文選題：血小板 + 血小板糖蛋白Ⅵ　； 參考：《蘇州大學》2005年博士論文

【摘要】：血栓性疾病嚴重威脅人類健康。動脈血栓形成常導致相應臟器功能衰竭。研 究血栓形成機制及探索抗血栓治療方法是重要的研究方向。在動脈血栓形成中血 小板發(fā)揮重要作用,血小板通過其表面膜糖蛋白(如GPⅠb-Ⅸ-Ⅴ,GPⅡb-Ⅲa,GPⅥ, GPⅠa-Ⅱa)與損傷后暴露的血管內(nèi)皮下膠原發(fā)生粘附,繼而在損傷部位形成血小板 凝塊、促進凝血發(fā)生、導致血栓形成。由此可見,在血栓形成的起始階段,血小 板與膠原的有效粘附是不可缺少的先決條件,抑制血小板粘附功能將產(chǎn)生顯著的 抗血栓功效。新型抗血栓藥物Abciximab阻斷GPⅡb-Ⅲa與纖維蛋白原結(jié)合而發(fā)揮 抗血栓作用,但也存在引起嚴重出血的潛在危險。近年來,抗粘附治療作為新的 抗血栓手段已引起廣泛關(guān)注,通過抑制GPⅠb—vWF—膠原軸和GPⅥ/GPⅠa-Ⅱa—膠 原軸阻斷血小板與膠原的粘附,即在早期階段阻止血小板的粘附、活化,可能起 到更好的抗血栓形成作用,并可減少出血的危險性。在高剪切力條件下,血小板 與膠原粘附依賴膠原受體GPⅥ、GPⅠa-Ⅱa,和間接膠原受體GPⅠb-Ⅸ-Ⅴ。而血小板 粘附后的活化過程主要由GPⅥ所介導。GPⅥ是血小板重要的膠原受體,生理狀 態(tài)下,GPⅥ與FcR γ鏈形成異源二聚體,共同發(fā)揮信號轉(zhuǎn)導作用。GPⅥ基因剔 除或抑制GPⅥ功能均可特異性地阻止血小板與膠原的粘附和聚集,對正常止血功 能影響小。因而,GPⅥ成為抗粘附及抗血栓治療的新靶點,GPⅥ功能抑制劑有 望成為新的抗血栓藥物。 基于上述GPⅥ在血栓形成中的重要性,我們開展了GPⅥ功能研究及抗GPⅥ 單克隆抗體的研制工作,以探索抗血栓治療的新途徑。采用基因重組技術(shù)克隆了 GPⅥ胞外區(qū)基因片斷,并在原核細胞中成功表達。以重組蛋白為抗原免疫小鼠, 采用細胞融合和單克隆篩選技術(shù)制備了抗GPⅥ單克隆抗體;同時利用分子生物學 技術(shù)克隆了該抗體的重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)基因片斷,經(jīng)連接子連接后制備了 單鏈抗體,并在原核細胞中表達。利用血小板聚集試驗和流式小室技術(shù)觀察了該 單抗和單鏈抗體對膠原誘導的血小板聚集,以及對血小板與膠原表面粘附的抑制 情況。 一、以含GPⅥ全長cDNA質(zhì)粒pBluescript KS(-)-GPⅥ為模板,采用PCR方 法擴增GPⅥ胞外區(qū)片斷cDNA序列,構(gòu)建了表達載體pET-20b(+)-GPⅥ,轉(zhuǎn)化 大腸桿菌BL21(DE3)pLysS,經(jīng)IPTG誘導表達目的蛋白。12%SDS-PAGE分析
[Abstract]:Thrombotic diseases are a serious threat to human health. Arterial thrombosis often leads to organ failure. Research Investigating the mechanism of thrombosis and exploring antithrombotic therapy are important research directions. Blood in arterial thrombosis Platelets play an important role in platelets through their surface glycoproteins (such as GP 鈪，

本文編號：1791146