本文選題：人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 + 長(zhǎng)鏈非編碼RNA　； 參考：《中山大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)科學(xué)版)》2014年02期

【摘要】：【目的】篩選和初步鑒定人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(hMSC)成骨分化相關(guān)的長(zhǎng)鏈非編碼RNA(lncRNA)�！痉椒ā坷肦efseq,UCSC knowngenes,Ensembl,H-invDB 7.0,RNAdb 2.0,NRED生物軟件分析成骨基因相關(guān)的lncRNA,綜合獲得可能的成骨相關(guān)lncRNA;3例骨髓標(biāo)本來(lái)源于行腰椎手術(shù)患者,密度梯度法分離擴(kuò)增hMSC后,分成骨誘導(dǎo)組和對(duì)照組,地塞米松、維生素C、β-甘油磷酸鈉誘導(dǎo)hMSC成骨分化,通過(guò)ALP測(cè)定及鈣結(jié)節(jié)茜素紅染色進(jìn)行成骨誘導(dǎo)鑒定;qRT-PCR驗(yàn)證hMSC成骨分化前、后差異表達(dá)的lncRNA,以及成骨分化前、后差異表達(dá)的基因BMP1、MSX1、Runx2、Smurf-1、ALP。【結(jié)果】通過(guò)上述生物軟件綜合分析發(fā)現(xiàn)3個(gè)成骨基因MSX1、BMP1和Smurf1周圍存在相關(guān)lncRNA。4個(gè)lncRNA(AK129811、AK024937、AK096529、uc003ups)與成骨基因Smurf-1相關(guān);2個(gè)lncRNA(AF289591和uc003xbe)與成骨基因BMP1相關(guān);1個(gè)lncRNA(AK056311)與成骨基因MSX1相關(guān)。ALP檢測(cè)示:與對(duì)照組細(xì)胞相比,成骨誘導(dǎo)組細(xì)胞1周ALP值最高,達(dá)到(16.82±1.64)nmol/min,隨著誘導(dǎo)時(shí)間的延長(zhǎng),ALP值逐漸降低,3周降至(8.37±1.01)nmol/min。鈣結(jié)節(jié)染色顯示hMSC成骨誘導(dǎo)分化2周后胞外開(kāi)始出現(xiàn)少量鈣結(jié)節(jié),隨著誘導(dǎo)時(shí)間延長(zhǎng)鈣結(jié)節(jié)數(shù)量逐漸增加,成骨誘導(dǎo)至第3周鈣結(jié)節(jié)最多,定量測(cè)定鈣質(zhì)量濃度達(dá)(716±49)mg/mL。RT-qPCR結(jié)果顯示絕大部分lncRNA在hMSC成骨分化過(guò)程中表達(dá)均下調(diào),其中2個(gè)與Smurf-1相關(guān)lncRNA(AK096529和uc003ups)與成骨誘導(dǎo)前相比,存在顯著性下調(diào)。1個(gè)與MSX1相關(guān)的lncRNA(AK056311)與成骨誘導(dǎo)前相比,也存在顯著性下調(diào)。同時(shí),成骨分化基因Runx2、ALP表達(dá)顯著性上調(diào),MSX1、Smurf-1表達(dá)顯著性下調(diào)。【結(jié)論】結(jié)合既往研究結(jié)果分析:AK096529和uc003ups可能通過(guò)正向調(diào)控Smurf1,促使Smurf1下調(diào),減少Runx2的降解,繼而促進(jìn)hMSC的成骨分化。
[Abstract]:[objective] to screen and identify human bone marrow mesenchymal stem cells (MSCs) for long chain noncoding RNAs (LNcRNAs) associated with osteogenic differentiation. [methods] the osteogenic gene related LNcRNAs were analyzed by RefseqSer UCSC knowngenesH- InDB 7. 0 and RNAdb 2. 0 NRED bioassay software, and the possible osteoblast-related LNcRNA3 was obtained. Bone marrow specimens were obtained from patients undergoing lumbar surgery. After hMSC was isolated and amplified by density gradient method, it was divided into two groups: bone induction group and control group. Dexamethasone, vitamin C, 尾 -glycerophosphate induced hMSC osteogenic differentiation. ALP and calcium nodule alizarin red staining were used to identify the osteogenic differentiation of hMSC before osteogenic differentiation. After differential expression of lncRNAs, as well as before osteogenic differentiation, [results] based on the comprehensive analysis of the above biomedical software, three osteogenic genes MSX1, BMP1, BMP1 and Smurf1 were found to have lncRNA.4 associated with the osteogenic gene Smurf-1; two lncRNA(AF289591 and uc003xbewere associated with the osteogenic gene BMP1; and one LNC RNAAK-056311) was found to be associated with the osteogenic gene Smurf-1, and two lncRNA(AF289591 and uc003xbewere associated with the osteogenic gene BMP1. Osteoblast gene MSX1 related. ALP detection: compared with the control cells, The ALP value of osteoblast induction group was the highest at 1 week, reaching 16.82 鹵1.64 nmol / min, and gradually decreased to 8.37 鹵1.01nmol / min at 3 weeks with the prolongation of induction time. Calcium nodule staining showed that a small number of extracellular calcium nodules began to appear 2 weeks after osteogenic differentiation of hMSC, and the number of calcium nodules increased gradually with the prolongation of induction time, and the number of calcium nodules increased to the third week after osteogenesis induction. The results of quantitative determination of calcium concentration up to 716 鹵49)mg/mL.RT-qPCR showed that most of lncRNA expression was down-regulated during osteogenic differentiation of hMSC, two of which were compared with Smurf-1 related lncRNA(AK096529 and uc003ups before osteogenesis. There was a significant down-regulation. There was also a significant down-regulation of MSX1 related LNC RNA AK056311) compared with that before osteogenesis. At the same time, the expression of Osteogenic differentiation gene Runx2ALP significantly up-regulated the expression of Smurf-1. [conclusion] combined with previous studies, it was found that the expression of Smurf-1 might be down-regulated by the positive regulation of Smurf1 by the expression of Smurf1, and the degradation of Runx2 could be reduced, and then the osteogenic differentiation of hMSC could be promoted.
【作者單位】： 南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院骨科;中山大學(xué)骨科研究所;江西省婦幼保健院兒童保健科;
【基金】：江西省教育廳科研項(xiàng)目(GJJ12082)
【分類號(hào)】：R363

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1787320